肝胆清片对ConA诱导小鼠肝损伤保护作用的研究.docVIP

肝胆清片对ConA诱导小鼠肝损伤保护作用的研究 　　【摘要】 目的：观察肝胆清片对肝损伤小鼠（ConA诱导）的保护作用。方法：通过测定血清丙氨酸转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）以及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、肝匀浆超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）等数值，研究肝胆清片对小鼠肝脏的保护作用。结果：肝胆清片高剂量组能够明显降低肝损伤小鼠模型（ConA诱导）的血清ALT、AST、TNF-α、肝匀浆MDA，提高肝匀浆SOD（P0.01）。结论：肝胆清片对ConA诱导肝损伤小鼠具有一定的保护作用。 　　【关键词】 肝胆清片； 肝损伤； ConA 　　中图分类号 R575 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2014）9-0140-02 　　肝胆清片是江苏黄河药业股份有限公司根据《国家中药标准汇编》分册中的“肝胆清胶囊”改变剂型的中药八类新药。其处方组成为：猪鬃草、金钱草、龙胆、大黄、黄连、延胡索、鸡内金、赭石、吴茱萸；功能主治为：清热祛湿、利胆排石。用于肝胆湿热所致的胆囊炎、胆石症。胆囊炎属中医“胁痛”、“黄疸”、“肝胀”、“胆胀”、“腹痛”等病范畴，有急、慢性之分，且往往与胆石症同时并存。中医药治疗胆囊炎、胆石症方面有着悠久的历史，流传和积累了许多有效方剂。这些经验和方剂疗效确切、安全可靠，经过现代制药方法制成服用方便、便于携带的新型中成药有着非常大的现实意义。肝胆清胶囊即是由临床经验方改进提高而成的现代中成药，对如上诸症有满意的疗效。鉴于胶囊剂在生产过程当中成品率较低，且对水分要求严格，改剂型为片剂可以克服如上问题，提高本品的质量，使之更加可靠稳定，以便于临床上的广泛应用。本文从现代药理学角度探讨肝胆清片对肝损伤小鼠（ConA诱导）的保护作用，以期为阐述肝胆清片对免疫性肝损伤保护作用提供临床前数据。 　　1 材料与方法 　　1.1 试药 　　肝胆清片（江苏黄河药业股份有限公司）；联苯双酯片（上海信谊天平药业有限公司）。实验前用灭菌蒸馏水溶解配成所需浓度。 　　1.2 动物 　　清洁级Balb/c小鼠，雄性，6～7周龄，购自上海斯莱克动物实验公司。 　　1.3 试剂 　　ConA为Sigma产品；MDA、SOD、ALT、AST、TNF-α、考马斯亮蓝试剂盒均购自上海生工。 　　1.4 模型制备及给药方法 　　雄性Balb/c小鼠60只随机分成肝胆清高、中、低剂量组、联苯双酯组、空白对照组、模型组，每组10只。空白对照组及模型组给予生理盐水，联苯双酯组给予200 mg/kg联苯双酯，肝胆清高、中、低剂量分别为12、6、3 g/kg，灌胃，每天给药1次，连续10 d。末次给药4 h后，正常组尾部生理盐水，静注，其余组尾部ConA 20 mg/kg，静注。禁食不禁水，8 h后摘眼球取血，离心取血清；取上述各个实验组小鼠肝脏，液氮中保存[1-2]。 　　1.5 血清AST、ALT及TNF-α测定 　　实验中通过眼球取得的全血离心，取上清，按照AST、ALT及TNF-α试剂盒进行测定。 　　1.6 肝匀浆MDA、SOD的测定 　　准确称取1.4中液氮保存的小鼠肝脏，加入9倍预冷的生理盐水，匀浆，离心后去上清液，按MDA、SOD试剂盒说明书进行测试上述两项数据。同时测定小鼠肝脏的蛋白质含量（考马斯亮蓝法）。 　　1.7 统计学处理 　　将上述数值用SPSS 18.0软件进行统计学分析，计量资料采用（x±s）表示，采用t检验，P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 肝胆清片对肝损伤小鼠（ConA诱导）血清ALT和AST的影响 　　表1显示，ConA诱导的肝损伤小鼠血清ALT、AST与空白对照组比较有显著的升高（P0.05）。但低剂量组与联苯双酯组比较差异有统计学意义（P0.01）。 　　表1 各组小鼠血清AST、ALT比较 U/L 　　组别 AST ALT 　　空白对照组（n=10） 35±6 44±6 　　模型组（n=10） 156±22# 165±29# 　　高剂量肝胆清组（n=10） 53±11*# 61±12*# 　　中剂量肝胆清组（n=10） 84±18*# 94±25*# 　　低剂量肝胆清组（n=10） 146±25# 161±29# 　　联苯双酯组（n=10） 43±12* 57±16* 　　*与模型组比较，P0.01；#与空白对照组比较，P0.01 　　2.2 肝胆清片对肝损伤小鼠（ConA诱导）血清TNF-α的影响 　　表2显示，ConA诱导肝损伤小鼠血清TNF-α与空白对照组比较有显著的升高（P0.01），表明模型成功；给予肝胆清后，血清TNF-α明显下降，尤其是高剂量组。但低剂量组降低血清TNF-α较低。