肠艾舒对小鼠CT―26大肠癌组织Ki67和PCNA表达的影响.docVIP

肠艾舒对小鼠CT―26大肠癌组织Ki67和PCNA表达的影响 　　摘要：目的 观察肠艾舒对荷瘤小鼠CT-26大肠癌的抑瘤作用及其对肿瘤组织Ki67、PCNA表达的影响。方法 将40只BALB/c小鼠随机分为4组，右前腋下接种CT-26细胞造模，空白组（NS 0.6 mL）、化疗组（卡培他滨205.5 mg/kg）、中药高剂量组（肠艾舒51.38 g/kg）、中药低剂量组（肠艾舒17.13 g/kg）隔日灌胃，15 d后计算抑瘤率，免疫组化法检测肿瘤组织Ki67、PCNA的表达。结果 与空白组比较，化疗组、中药高剂量组、中药低剂量组抑瘤率分别为43.35%、29.48%、13.30%；与空白组比较，各治疗组Ki67、PCNA标记指数差异均有统计学意义（P0.05，P0.01）。结论 肠艾舒对小鼠CT-26大肠癌的体内生长有一定抑制作用，可能与其下调肿瘤组织Ki67、PCNA表达有关。 　　关键词：大肠癌；肠艾舒；抑瘤作用；Ki67；PCNA；小鼠 　　中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）04-0052-03 　　大肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，其发病率在发达国家恶性肿瘤中居第2位，其粗发病率约为每年40/10万～66/10万人[1]，我国为大肠癌低发地区，但发病率呈逐渐上升趋势，发病率约为15.7/10万人，在恶性肿瘤中占第4位[2]。手术及化疗是大肠癌的主要治疗手段，手术切除后大肠癌患者5年生存率约为70%，有40%～50%的患者出现术后复发和转移，其中绝大多数失去再治愈的机会[3]。目前，综合治疗肿瘤已成为趋势，中医药扶正祛邪、软坚散结等作用可增强机体抵抗力、抑制肿瘤细胞活性、减少复发转移、延长患者生存期，已成为大肠癌综合治疗不可缺少的手段。为揭示肠艾舒的抗癌作用，我们用小鼠CT-26大肠癌细胞造模，通过体内实验观察肿瘤生长情况，并采用免疫组化方法检测Ki67和PCNA在大肠癌组织中的表达，探讨肠艾舒抗肿瘤的作用机理。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物 　　ALB/c小鼠，8周龄，雌雄各半，体质量17～26 g，购于成都达硕生物科技有限公司，动物合格证号：0002735。 　　1.2 药物与瘤株 　　肠艾舒（由太子参、白术、茯苓、薏苡仁、重楼、天龙、野葡萄根等组成）中药饮片购自云南省中医医院；卡培他滨片，上海罗氏制药有限公司（国药准字；小鼠大肠癌CT-26细胞株，云南省肿瘤研究所提供。 　　1.3 主要试剂与仪器 　　PBS（批号NYH0959）、小牛血清（批号NYH0929）、1640（批号NYH0953）、双抗（批号NYH0969）、胰酶（批号NYH0949）均购自thermo HYclone公司。一次性细胞培养瓶（GIBCO公司），CO2培养箱（Forma公司），高速低温离心机（Heraeus）。 　　1.4 造模 　　复苏小鼠大肠癌细胞株CT-26，用含10%标准小牛血清（Hyclone）的1640（Hyclone）全培养基常规传代培养。将对数生长期的细胞用0.25%胰蛋白酶消化，吹打成细胞悬液，1000 r/min离心5 min弃上清液，加适量生理盐水调整为适宜浓度l×l07个/mL，接种于BALB/c小鼠右前腋下，每只小鼠接种0.2 mL。 　　1.5 药物制备 　　将肠艾舒复方饮片加4倍体积水浸泡30 min，煮沸后20 min，纱布过滤出药液，药渣再加2倍体积水煮沸，方法同前，合并两次药液，旋转蒸发仪浓缩药液，配置成相应浓度，置于4 ℃冷藏备用。 　　1.6 分组与给药 　　将40只小鼠正常喂养3 d后造模，并按雌雄随机分为空白组（生理盐水0.6 mL/20 g）、化疗组（卡培他滨205.5 mg/kg）、中药高剂量组（肠艾舒51.38 g/kg）、中药低剂量组（肠艾舒17.13 g/kg），隔日灌胃。 　　1.7 肿瘤生长情况观察 　　接种15 d后停药48 h处死动物。剥离肿瘤，称重，计算抑瘤率[（对照组平均瘤质量-实验组平均瘤质量）/对照组平均瘤质量×100%]。 　　1.8 肿瘤组织Ki67、PCNA表达测定 　　肿瘤组织固定后做病理检查。采用免疫组化染色法检测CT-26瘤组织中Ki67、PCNA的表达。Ki67、PCNA单克隆抗体和试剂盒由云南省中医医院病理科提供，操作步骤按说明进行。Ki67定位于细胞核中，阳性者细胞核呈棕褐色颗粒，PCNA定位于细胞核，阳性者细胞核内或细胞浆内出现棕黄色颗粒。分别由病理科医师在不知情前提下，在40倍镜下随机观察5个视野，计数阳性细胞数，取平均值，即为抗原阳性细胞标记指数。 　　1.9 统计学方法 　　采用SPSS17.0统计软件进行分析。计量资