不孕不育患者外周血淋巴细胞G显带法染色体核型分析.docVIP

不孕不育患者外周血淋巴细胞G显带法染色体核型分析 　　【摘 要】目的：探讨不孕不育患者与染色体异常的关系。方法：用RPMI 1640+胎牛血+PHA培养体系，采用全血培养法，对308例不孕不育患者外周血淋巴细胞染色体核型分析。结果：308例不孕不育患者中检出异常核型16例，占受检人数的5.2%，其中男性7例，女性9例，这些异常核型中，9例染色体平衡易位，3例为罗伯逊易位，4例超二倍体（47，XXY 3例；47，XXX 1例）。结论：不孕不育与染色体有关。不孕不育患者外周血淋巴细胞染色体异常率为5.2%，其引起不孕不育的主要染色体核型为平衡易位。 　　【关键词】不孕不育；染色体核型；G显带法 　　【中图分类号】R71 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）03-0603-01 　　不孕不育是指在不避孕的情况下，经过一年的性生活仍未能怀孕。不孕不育原因很多，除排卵、盆腔和宫颈、输精管等因素外，染色体异常是其原因之一。阻碍受孕的因素有女性、男性或男女双方因素，据统计女性因素占60%，男性因素占30%，男女双方因素占10%。本文对我实验室308例不孕不育患者进行外周血淋巴细胞染色体核型分析，结果报告如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 选择2009年3月至2011年12月来我院妇产科、男性科咨询的308例不孕不育患者（不包括不良妊娠史），其中163例女性患者，145例男性患者。并确诊无功能性疾病及其它相关性病变，再进行外周血淋巴细胞染色体分析。 　　1.2 方法 　　1.2.1 外周血淋巴细胞染色体制备 取肝素抗凝血3ml，1000r/min，离心10min，抽取白膜层置 　　于培养体系中，置37℃培养箱中培养72h，每天轻轻摇匀一次，收获细胞前2h加入5ug/ml的秋水仙素200ul，然后以1000r/min，离心10min去掉上清液，加入预温到37℃的0.075mol/l的KCL低渗液8ml，置37℃水浴箱中30min，中间吹打一次，再加入1ml甲醇：冰醋酸（甲醇：冰醋酸比例为3：1）的固定液进行预固定，充分吹打均匀，1000r/min，离心10min去掉上清液，加入固定液8ml，静止固定10min，再离心10min去上清。进行2次固定。最后加固定液至8ml左右，放置4℃冰箱中过夜次日滴片，滴片时在底物中加入新鲜配制的固定液0.5ml左右，制成细胞悬液并滴片，放置80℃左右的烤片机上烘烤4h，室温放置2天后做G显带。 　　1.2.2 G显带与染色 2.5%胰酶0.5ml加入到50ml的Hank`S液中置37℃水浴箱中，15min后作带，染液为姬姆萨与瑞氏混合染液。将老化的标本在胰酶中作用15～30s，用混合染液染色5～10min，自来水漂洗、晾干，进行染色体G显带效果观察。 　　1.2.3 染色体G显带观察与分析 低倍镜下选择分散良好的长度适中的分裂相，在转换为油镜观察。每例病人分析30个染色体中期分裂相。按《人类细胞遗传学国际命名体制（ISCN1995）》进行染色体核行分析[1]。 　　2 结果 　　308例不孕不育患者中检出异常核型16例，占受检人数的5.2%，其中男性7例，女性9例，这些异常核型中，9例为染色体平衡易位，分别为：46，XY，t（4；9） 2例、46，XX，t（10；13） 1例、46，XX，t（11；14） 3例、46，XX，t（5；11） 1例、46，XY，t（1；20） 1例、46，XX，t（7；11） 1例，3例为罗伯逊易位，分别为：45，XY，-13，-14，+t（13；14） 1例、45，XX，-13，-14，+t（13；14） 2例，4例超二倍体，别为：47，XXY 3例；47，XXX 1例。 　　3 讨论 　　本文研究结果显示在不孕不育患者中有9例为平衡易位携带者，占所有异常核型的56.3%，占受检总人数的2.9%，这与李凡、鲍时华[2]等报道的结果一致，表明平衡易位是引起不孕不育中最常见的染色体异常类型。可见不孕不育与染色体异常，特别是平衡易位有直接的因果关系。据文献报导，正常人群中染色体易位发生率为0.2%[3]，而不孕不育或习惯性流产人群中的发生率为正常人群的10～20倍。其导致流产的原因为此类患者产生了不平衡配子，从而导致流产、死胎、畸形儿或智力低下等遗传效应[4]。罗伯逊易位是指两个近端着丝粒染色体在着丝处或其附近断裂后融合成一个染色体，结果染色体数目减少，长臂数不变，但短臂数减少两条。由于两条短臂小，遗传基因不多，遗传效应不明显，所以这种易位携带者表型及智力发育一般正常[5]。如果是一个同源罗伯逊易位携带者一般患者表型、智力是正常的，但在配子的形成过程中，却产生两种类型的非正常配子，与正常配子结合，形成单体或三体