体细胞突变在系统性红斑狼疮的自身抗体产生中的作用.docVIP

体细胞突变在系统性红斑狼疮的自身抗体产生中的作用 　　【摘 要】系统性红斑狼疮是最经典的慢性自身免疫性疾病，该病患者血清中存在多种自身抗核抗体。然而这些自身抗体的产生机制十分复杂，涉及多方面因素。体细胞突变便是诸多因素中的一个，由于目前国内有关体细胞突变与自身抗体关系的综述甚少，本文借此机会就这方面的研究状况作一概述，旨在更好地理清体细胞突变与SLE自身抗体产生的关系。 　　【关键词】系统性红斑狼疮；体细胞突变；高频突变；抗dsDNA；生发中心 　　【中图分类号】R593. 241 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2014）02-0872-02 　　1 引言 　　系统性红斑狼疮（SLE）是一种病因未知的全身性自身免疫性疾病。在SLE患者血清中存在多种自身抗体，能结合dsDNA、RNA、染色体、RNA结合蛋白和磷脂。其中，具有诊断价值的自身抗体包括抗dsDNA、抗SM和抗心磷脂抗体。抗dsDNA是在SLE中研究得最多自身抗体，其产生与人类SLE疾病和小鼠自身性狼疮样肾炎相关。抗dsDNA常被发现于肾脏沉积，并且可以从肾脏洗脱。早期研究已证明，小鼠和人类单克隆抗dsDNA均可以通过过继转移到正常小鼠引起蛋白尿。然而，抗dsDNA在肾小球沉积的机制仍不清楚。 　　2 体细胞突变发生于抗dsDNA 的VH和VL区 　　第一个在分子细节上分析的抗DNA的抗体是IgM型抗DNA，是从健康的人和鼠中分离得到的。IgM型抗DNA属于天然抗体库，具有多反应性。这些IgM型抗体是由V区缺乏体细胞突变的免疫球蛋白可变区基因的重链（VH）和轻链（VL）编码而产生的。早期不成熟的B细胞库里有高达50%的不成熟B细胞表达针对自身核抗原的多反应性受体。绝大多数的多反应性和自身反应性克隆会在B细胞发育的两个不同耐受检查站被清除。尽管如此，在初始细胞库里仍有约6%的子集存在多反应性。另人意外的是，来自健康人受试者的IgG记忆B细胞也显示了很高的多反应性[1]。目前，仍不清楚的是，这群多反应性的B细胞能否代表高亲和力的抗dsDNA B细胞的前体。 　　与这些天然抗体的VH和VL序列分子分析相比，来源于鼠狼疮模型和SLE患者的抗dsDNA的系统性分析揭示了所有这些抗体都出现了体细胞高频突变的迹象。研究表明，在MRL/lpr小鼠中，可能先形成RF B细胞，不久后转变成抗dsDNA B细胞[2]。在所有已分析的杂交瘤中，一个人SLE来源的杂交瘤抗dsDNA的限制性选择实验证明了VH和VL区存在体细胞突变现象[3]。 　　3 抗dsDNA的体细胞突变模式 　　抗dsDNA的体细胞突变模式在过去已被深入地分析。一般认为，在狼疮鼠和SLE患者抗dsDNA的V区的互补决定区（CDR）上观察到高频率的置换突变提示抗原驱动了抗dsDNA的选择过程。在抗dsDNA的B细胞中，高频率的体细胞的置换突变将导致产生更多的精氨酸（R）、赖氨酸（K）和天冬酰胺（N），这些氨基酸非常有利于调节带负电的磷酸二酯键和dsDNA的碱基配对的相互作用。另外，在抗dsDNA重链的框架3区（FR3）位点76处会频繁出现体细胞突变来源的R残基，提示该结构域在dsDNA结合方面起着显著作用。R残基出现于抗dsDNA也可由VH-D-JH和 VL-JL重排时CDR3区的连接多样性而产生。此外，非常规的机制也可以参与这个过程，包括阅读框3中D基因的使用、D基因倒置以及D-D融合。 　　R残基对于dsDNA结合的重要性已用VH3H9链进行了系统的分析，该链是MRL /lpr小鼠来源的抗dsDNA H链的一个原型。在H-CDR2区一个R残基的反转几乎会消除其对dsDNA的结合，然而在这些区域出现由体细胞突变转换的精氨酸时能显著增加其对dsDNA的亲和力[4]。加之，几个R残基的引入也能增加抗dsDNA对dsDNA的亲和力，这表明R残基对抗dsDNA起着增强剂的作用。同时，体细胞突变转变的R残基亦能影响人源单克隆抗体对组蛋白、SmD和RO等自身抗原的结合。 　　4 自身反应B细胞的高频突变发生于GC内 　　抗dsDNA和多数其他抗核自身抗体非常类似于由针对病毒或半抗原的T细胞依赖性再次免疫应答所产生的抗体。由于体细胞突变和T细胞依赖的免疫反应中的抗原选择都发生于生发中心（GC），这让人很容易推测，在SLE和鼠狼疮中的抗dsDNA也来源于GC反应中。然而，研究却意外发现，在MRL/lpr小鼠的T细胞区-红髓交界的滤泡外围特定位置，自身反应性B细胞可以进行活跃的高频突变[5]。最近，有一项自身免疫的FcgRIIB缺陷小鼠GC B细胞的深入分析显示，表达GC标志物的体细胞突变来源的B细胞显著地富集于抗核自身抗体[6]。这些结果支持另一个观点，即自身反应B细胞的高频突变发生于G