制作洋葱鳞片叶表皮细胞实验的教学体会.docVIP

制作洋葱鳞片叶表皮细胞实验的教学体会 　　[摘 要] 目的：探讨制作洋葱鳞片叶表皮细胞实验教学改革。方法：对制片的取材、制片及染色进行改进。结果：找到洋葱鳞片叶表皮细胞实验的最佳条件。结论：洋葱鳞片叶表皮细胞制作实验改革，提高了实验教学质量。 　　[关键词] 洋葱；鳞片叶细胞；制片方法；染色方法 　　【中图分类号】 G633 【文献标识码】 A 【文章编号】 1007-4244（2013）11-152-1 　　洋葱鳞片叶细胞实验是一个经典的细胞学实验，在医学院校《医学生物学》、《细胞遗传学》、《细胞生物学》等学科均有开设，实验中学生可观察到细胞壁、细胞质、液泡和细胞核及核仁。该实验目的是掌握光学显微镜下植物细胞的基本结构，了解植物与动物细胞的区别。本实验便于学生更好的认识细胞结构，构建细胞是生物体基本结构单位的理念，从而为学生搭建一座通往探索细胞生命科学的桥梁。但由于方法本身的缺陷，细胞结构之间的界限和对比不明显。学生在众多细胞中难以找到典型细胞，难以清晰认识基本结构，而标注错误，教学效果不佳，实验操作以失败告终。其原因主要有三点：一是标本取材制片、二是标本染色、三是标本着色的对比度。笔者反复实验对取材方法、制片方法及染色方法进行了改进，寻找洋葱鳞片叶表皮细胞实验的最佳条件，提高了洋葱鳞片叶细胞实验的质量，确保该实验顺利完成。 　　一、取材方法的改进 　　实验中洋葱表皮的撕取制约着实验的进程和效果，实验教学中发现：采用教材中撕取方法的效果不好：首先撕下的表皮厚薄不均，标本太厚，导致染色后在显微镜下多层细胞重叠看不清；标本太薄，撕下的表皮容易卷曲，不易在载玻片上展平、且表皮细胞易被破坏，从而看到含有紫色液泡的细胞少。 　　为此对撕取表皮的方法作如下改进。新鲜的洋葱把最外层剥掉，放置7天左右，取材时选取的洋葱鳞片应是成熟的部位，这样细胞比较大，并已经成型，有利于染色和观察。取材时用刀片在洋葱鳞叶的内表皮划出5mm×5mm的小方格，再用镊子从划好的小方格的一个角上插入一点，然后夹住并小心撕下表皮。这样撕取的表皮既大小适中又不会带有叶肉。取材方法改进后发现：学生在撕取洋葱表皮时一次成功率高，表皮既不带叶肉也不易卷曲，标本染色后镜下观察也看不到重叠细胞，这样不但加快实验的速度，还确保了实验的质量。 　　二、制片方法的改进 　　教材中要求学生擦净载玻片和盖玻片后在载玻片中央滴加一滴碘液，然后将取好的标本铺展在碘液中，加盖玻片。实验中发现，学生在加盖盖玻片后会出现染液不能浸满盖玻片的情况，学生看到盖玻片下有空隙，要么推、按、压、盖玻片，要么用滴管从盖玻片一侧加染液，这两种情况都容易产生气泡，影响细胞液泡观察。为此对制片的方法作如下改进：滴加染液2滴，洋葱有两个面：光滑面和粗糙面，在向染液中放标本的时候，我们应该使粗糙面向上，光滑面向下。在染液中展平时，用镊子压住鳞片的一侧，再用解剖针轻轻的在鳞片上拉平，这样就使得鳞片的粗糙面平滑，用镊子夹住盖玻片的一侧边缘，使其另一侧以450角先接触染液，然后再慢慢地降低盖玻片，当染液漫过盖玻片的一半并超过洋葱表皮的位置时，再慢慢放平盖玻片。最后用吸水纸轻轻地醮去盖玻片四周多余的染液。学生通过此方法操作后不再发现标本片有气泡产生。确保了染色后标本片观察的质量。 　　三、染色方法的改进 　　教材中标本片制作好后，碘液稀释液要染色10分钟。在实验中发现，碘液染色后细胞壁、细胞质、液泡、细胞核、在形态上、清晰度上对比度不明显，并且染色时间过长。一个成熟的洋葱鳞叶表皮细胞，当细胞液的浓度小于外界溶液浓度时，细胞失水发生质壁分离，可明显看到细胞壁、细胞质、细胞核，液泡。通过多次实验结果的比较，在染色方法上做了改进。染液改为用0.5?孔雀绿，染色前染液置于37℃的恒温箱中24小时。0.5?孔雀绿的配置。称量5g孔雀绿于研磨中加10mL蒸馏水研磨10分钟至全部溶解，用90mL蒸馏水清洗研磨一同倒入棕色试剂瓶中，得到母液。使用前稀释至0.5?的浓度。在干净的载玻片上滴加2-3滴0.5?孔雀绿染液，按照改进的制片方法进行操作，把标本置于载玻片上，制作标本片2张。A标本片染色时间3分钟。B标本片染色时间3分钟左右时加5%硝酸钾溶液对质壁进行分离。经过染色，镜下A标本片细胞液泡、细胞核颜色较深，与细胞壁、细胞质区分明显。B标本片经过质壁分离，明显看到细胞壁、细胞质膜、细胞质，液泡膜，液泡和细胞核、核仁形态结构完整、清晰。并在同一张标本片上看到不同细胞液泡数由多到少，液泡体积由小到大的形成过程。镜下标本清晰度高，对比度明显，通过观察细胞的大小，细胞壁的长度，液泡形成过程，细胞核在细胞的位置及细胞核与细胞体积的比例，可在学生眼前呈现一幅植物细胞的动态发育过程。不但提高了实验效果也丰富了实验内容。