吸入布地奈德混悬液对支气管哮喘豚鼠气道IL―13水平影响.docVIP

吸入布地奈德混悬液对支气管哮喘豚鼠气道IL―13水平影响 　　【摘要】目的探讨哮喘豚鼠气道中TGF-β1、IL-13、VEGF表达的变化，及黄芪对其的干预作用。方法健康雄性豚鼠40只随机分成4组：正常对照组（A组），模型组（B组），吸入布地奈德混悬液组（C组），地塞米松组（D组），每组10只。以腹腔内注射联合雾化吸入卵蛋白复制哮喘气道重塑模型，末次激发后24h处死豚鼠，以免疫组化方法测气道中IL-13的表达。结论布地奈德治疗组及地塞米松治疗组IL-13的表达相对于哮喘组均有不同程度的减轻，差异均有统计学意义，而布地奈德治疗组及地塞米松治疗组组内比较差异无统计学意义。 　　【关键词】哮喘；布地奈德混悬液；IL-13 　　文章编号：1004-7484（2013）-11-6828-01 　　支气管哮喘的基本特点为慢性炎症和气道高反应性[1]。哮喘反复发作时存在的急慢性炎症过程可引起气道不可逆结构性改变，当气道上皮下基底膜网状结构增厚和纤维化及平滑肌层增厚、血管增生扩张等改变时，称为气道重塑（airway remodeling）[2]。这就是临床上慢性持续性哮喘气流阻塞存在不可逆性成分的重要、原因。近几年，随着免疫学和分子生物学的进展，对哮喘的发病机制的研究有细胞水平进入了分子水平，细胞因子，粘附因子等炎症介质在近些年成为了研究的热点，说明上述因子在哮喘发病机制中具有重要的作用。目前的研究认为[3]IL-13可能参与了哮喘气道重塑的过程。目前糖皮质激素是治疗哮喘的首选药物，而吸入糖皮质激素可作用于炎症的多个环节，调控靶细胞的基因转录，抑制多种炎症因子的生成及炎症细胞的活化，提高β2受体的敏感性，进而防止气道重塑。有鉴于此，本研究通过向哮喘豚鼠模型雾化吸入布地奈德混悬液，以气道上皮组织中IL-13的表达作为观察指标，探讨吸入布地奈德混悬液在哮喘治疗中的作用机制及局部与全身用药的差异。1资料与方法 　　健康雄性豚鼠40只（由南华大学动物实验部提供，清洁级），12周龄左右，体重（400±50）g。豚鼠40只按随机数字分成对照组（A组）、哮喘组（B组）、吸入布地奈德组（C组）和地塞米松组（D组），每组10只。复制哮喘模型哮喘组首日和第15日两次致敏，10%卵清白蛋白1ml，腹腔注射，第二次致敏后一周开始超声雾化吸入3%的卵清白蛋白激发哮喘，依症状雾化吸入30s至3min，直到出现哮喘症状：呼吸增快，点头呼吸，躁动，隔日诱喘一次，共18次。地塞米松治疗组和吸入布地奈德治疗组致敏方法及诱喘方法同哮喘组，第21日起每次诱喘前30min雾化吸入布地奈德1mg和腹腔内注射地塞米松1.5mg/kg。对照组以生理盐水替代卵清白蛋白同步实验。动物处理：哮喘豚鼠于末次雾化吸入24h后，以1000u/ml肝素钠腹腔注射抗凝，水合氯醛（0.8g/kg）腹腔注射麻醉，无菌开胸穿刺心脏取血处死豚鼠，收集标本。通过气管插管导管（由中心静脉导管改成）灌注10%中性甲醛使肺叶充分膨胀，取一叶支气管肺组织做图像分析，其余肺组织置于10%中性甲醛中固定24h以上，常规石蜡包埋，切片行HE染色、免疫组化。IL-13抗体染色采用链霉亲和素-生物素-酶（SABC）免疫组化染色法。胞膜或胞浆内有棕黄色颗粒且着色明显高于背景者为阳性。免疫组化结果在400倍视野下，每张玻片随机取10个视野，用BLTS2080病理图象采集系统和Image Pro Plus 5.02专业图像分析软件，分别测定阳性颗粒的平均光密度值，进行分析处理。所有统计分析使用SPSS13.0软件进行分析，计量资料用资料用均数±标准差表示，组间均数差异的比较采用t检验，计数资料采用χ2检验，以p0.05为有统计学意义，p0.01代表差异非常显著。2结果 　　哮喘组切片可见气道黏膜、黏膜下层、肺泡区有大量呈棕黄色的阳性细胞，对照组切片可见气道黏膜、黏膜下层、肺泡区有少量呈棕黄色的阳性细胞，平均光密度值分析比较，哮喘组IL-13的平均光密度值均明显高于对照组，示哮喘组IL-13阳性表达明显强于对照组，而布地奈德治疗组及地塞米松治疗组IL-13的表达相对于哮喘组均有不同程度的减轻，差异均有统计学意义，而布地奈德治疗组及地塞米松治疗组组内比较差异无统计学意义，见表1。 　　3讨论 　　支气管哮喘是由多种细胞特别是肥大细胞、嗜酸性粒细胞和T淋巴细胞参与的气道慢性炎症。其发生是由遗传因素和环境因素共同作用的结果，免疫反应的异常在发病机制中起重要作用。目前大量的研究表明至少有10余种细胞、20余种细胞因子和50多种生物活性物质参与了哮喘的发生[4]。 　　IL-13是一个重要的介导变态反应的Th2型细胞因子，它的过度增加可诱发变态反应，如出现气道高反应性、嗜酸性粒细胞炎症、Ig-E增高等，还与多种粘附分子及趋化因