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* 铅法——显示酸性磷酸酶 姜富祥 研究生学院 2010071 铅法——显示酸性磷酸酶 〔原理〕 以β—甘油磷酸钠为底物，在酸性PH下，被ACP水解，释放出磷酸盐，遇铅离子则生成磷酸铅沉淀。在被S2-置换，最终生成硫酸铅棕色沉淀。反应式如下： ★ 酸性磷酸酶Acid Phosphatas（ACP） ACP的特性 ① PH 4.5～5.5适宜 ② 激活剂：Mn2+ ③ 抑制剂：NaF，有些ACP为Cu2+、酒石 酸盐、四氧嘧啶甲醛等抑制剂。 〔ACP定位〕 ① 溶酶体（颗粒状）内； ② 溶酶体外ACP存在于ER和胞液。 ③ 该酶活性高的器官：肾、肝、肠、脾、 肾上腺。 〔方法〕 标本：大白鼠肾、肝横冷箱切片（载片），厚6 微米。 固定：冰冻片或横冷箱切片。冻融，有时也可 用甲醛，但影响活性。 本实验不固定或固定于丙酮∶氯仿（1∶1） 混合液，4℃，2～5min 步骤： ① 将标本放于下列孵育液中 37℃， 10～15′ 孵育液： 0.1M醋酸缓冲液，PH5.2 15ml 0.24％硝酸铅 15ml 3％β—甘油磷酸钠 3 ml 33ml 混匀，置37℃水浴中15～30分钟后，过滤。 ② 于37℃蒸馏水中洗2次，每次1分钟。（温蒸馏水洗） ③ 入5％硫化胺，1～2分钟。 ④ 流水冲洗3～5分钟后，换蒸馏水。（可用Mayer苏木素复染核） ⑤ 用甘油明胶或Apathy氏糖胶封固。 〔结果〕酶活性部位→棕黑色硫化铅沉淀。 分布于肾近曲小管细胞核周围，肝细 胞毛细胆管周围均有棕黑色颗粒。 〔对照〕孵育液内加0.01M NaF（13.9mg / 33ml）→（—） 〔注意事项〕 ① 铅离子的浓度 →关键问题，没有底物，有 些组织吸附铅离子（+），因此必须用NaF 抑制酶活性→排除假阳性反应。 ② 孵育时间不可过长，否则染色扩散或核染色。 *
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