链霉菌的分子生物学.ppt

3.?? 链霉菌的分子生物学及其研究方法 主要内容 基因克隆 Gene Clone 基因克隆的四个基本步骤 如何克隆到目的基因 基因文库（gene library) 基因文库的大小（Size of library） 计算基因文库大小的公式 大肠杆菌基因文库大小的计算 人类基因文库大小的计算 不同载体对基因文库大小的影响 基因文库的特点 研究基因为什么要先克隆基因？ 基因组DNA（Genomic DNA)的制备 (一）. 克隆抗生素生物合成基因的一般过程 如何识别重组子（菌落） （二）. 克隆抗生素生物合成基因簇的策略 （1）克隆到标准宿主然后检测单个基因产物 例1. 对氨基苯甲酸合成酶基因的克隆 例2. 放线菌素生物合成基因的克隆 吩恶嗪酮合成酶基因的克隆 （2）生物合成阻断变株的互补 十一烷基灵菌红素生物合成阻断变株的互补 十一烷基灵菌红素生物合成阻断变株的互补 （3）抗生素生物合成基因的突变克隆(mutational cloning) 突变克隆(mutational cloning )的过程 挑选突变克隆菌株的过程 （4）先克隆抗性基因，然后 寻找与其连锁的其它基因 （5） 人工合成寡核苷酸探针探测相应菌体的基因文库 菌落原位杂交技术 杂交技术 （6）克隆整个生物合成基因簇到非抗生素产生菌中 头孢菌素C生物合成基因的克隆 （7）用一种已克隆的基因片段，探 测其它菌基因库中的同源基因 例1. 麦迪霉素生物合成基因簇的克隆 例2. 其它链霉菌同源基因的探测 （8）筛选产物超表达变株，以克隆正调节基因 正调节基因的表达与克隆 (三). 生物合成基因精细结构的研究 生物合成基因精细结构的研究 (1) 酶切图谱的建立 酶切（Restriction enzymes digestion) 电泳结果的分析 酶切图谱的绘制 (2) 亚克隆(Subclone) 电泳(electrophoresis)回收目的DNA片段 (3)DNA测序—核苷酸序列测定的意义 测序的过程与方法 Sanger 双脱氧链终止法 Sanger 双脱氧链终止法测序的原理-1 Sanger 双脱氧链终止法的基本原理-2 双脱氧核苷三磷酸的分子结构 Sanger 双脱氧链终止法的基本原理-3 DNASequencing (4) 测序结果的分析 核苷酸序列的计算机分析 DNA序列分析的网站 DNA序列分析-1 DNA序列分析-2 DNA序列分析-3 DNA序列分析-4 DNA序列分析的网站-2 测得DNA序列的检索 测得DNA序列的检索-2 检索结果 检索结果的同源性分析 检索基因库中已有的DNA序列 阿维菌素生物合成基因核苷酸序列的检索 检索到的阿维菌素生物合成基因核苷酸序列 阿维菌素生物合成基因的检索 相关文献的检索 获得原文献 DNA序列分析的得力助手 Gene Runner界面 Nucleic acid analysis-1 Nucleic acid analysis-2 lat 基因 lat基因核苷酸序列 粘贴 核苷酸序列 List cut sites by enzymes-1 List cut sites by enzymes -2 List cut sites by enzymes -3 List cut sites by enzymes -4 List cut sites by position-1 List cut sites by position-2 List cut sites by position-3 Open Reading Frame (ORF) analysis-1 Open Reading Frame (ORF) analysis-2 Open Reading Frame (ORF) analysis-3 Translation-1 Translation-2 Translation-3 Find-1 Find -2 Find-3 Find-4 (四). 克隆基因的生物功能研究 1. Gene complementation(基因互补) 2. Gene disruption（ knock out） Gene disruption（ knock out） 3. Gene replacement (基因置换） Gene replacement (基因置换） DNA双交换示意图 分子生物学研究常用网站 基因功能研究的主要方法: 1. Gene complementation(基因互补) 2. Gene disruption （ knock out 基因敲除） 3. Gene replacement (基因置