枸杞多糖对实验性正课件.ppt

枸杞多糖对小鼠NK细胞和白细胞活性的免疫调节作用 实验小组成员： 陈茜茜 5109001417 李光芹 5109001421 李美玲 5109001422 聂萌萌 5109001431 王雪琳 5109001436 赵 琳 5109001445 “枸杞子”名字的来历 相传战国时，在秦国境内黄河南岸、香山北麓（今卫宁）平原上，有一个青年农夫，乳名狗子，以农耕为业，娶妻杞氏。杞氏勤而贤惠，夫妻日出而作，日落而息，奉养老母，倒也勉强度日。时秦吞并六国，倾国之男丁，拓疆征战，狗子被召戍边。　　将军百战死，壮士十年归，狗子戍边归来，已是满脸须发。路上见正闹饥荒，田园荒芜，路人讨吃，饿殍遍地，众人面带菜色，孩子嗷嗷待哺。狗子甚为惶恐，不知老母与妻子现状如何。既到家，见老母发丝如银，神采奕奕，妻子面色红润，不像路人饥饿之状，甚为惊讶谓妻曰：“路见乡邻皆饥，唯母与尔饱满，何也？”妻对曰：“尔从军后，吾终日劳作，勉为生计，去今之年，蝗灾涝害，颗粒无收，吾采山间红果与母充饥，方勉其饿。”其母曰：“吾若非尔媳采红果食之，命已殒矣！”狗子喜泣，对妻更为敬之。邻人闻之，争相采食，谓之狗杞食。　　后人发觉，杞氏所采山间红果有滋阴补血、养肺健胃之功效，民间医生采之入药，改其名称 “枸杞子”。 　枸杞是我国传统名贵中药材，素有“红宝”美称，富含植物多糖、蛋白质、维生素等营养成分。 　　枸杞多糖是从枸杞中提取而得的一种水溶性多糖。已明确该多糖系蛋白多糖，由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖6种单糖成分组成. 　　经研究表明，枸杞多糖是枸杞子调节免疫、延缓衰老的主要活性成分，可改善老年人易疲劳、食欲不振和视力模糊等症状，并具有降血脂、抗脂肪肝、抗衰老等作用。 枸杞多糖 研究背景 枸杞为茄科植物枸杞成熟果实，其主要有效成分为枸杞多糖 (LBP（Lycium barbarium palysacharides,LBP）)，通过离子交换层析法进一步分离和纯化粗多糖，可得到一种蛋白多糖复合物LBP3p，具有免疫刺激作用。LBP 3p能增加人类外周血单核细胞中IL-2和TNF-α的表达，mRNA和蛋白水平都与LBP呈剂量相关。LBP 3p可以抑制移植性S180肉瘤的生长，增加巨噬细胞的噬菌能力、脾巨噬细胞的增殖和脾细胞的抗体分泌、受损T巨噬细胞的活力、IL-2 mRNA的表达和降低脂质过氧化。研究证明，LBP能调节小鼠骨髓树突细胞(树突细胞是体内重要抗原呈递细胞,在启动初次免疫应答中具有重要的作用)的表型和功能。并通过激活巨噬细胞来增强先天免疫，其机制可能与激活转录因子NF-κB和AP-1进而诱导TNF-α的生成以及增加MHCⅡ型共刺激分子有关。LBP、LBPF4和LBPF5可刺激脾T细胞增殖，其机制为激活转录因子NFAT和AP-1，促进CD25的表达，诱导IL-2和IFN-γ基因转录和蛋白表达，从而起到免疫增强作用。本文就枸杞多糖对小鼠自然杀伤细胞(NK)杀伤活性及外周血白细胞数量的影响作了进一步的研究。 研究目的及方法 目的： 探讨枸杞多糖对小鼠免疫功能的正向调节作用 方法： 以BALB／C小鼠为研究对象．灌服枸杞多糖20天．另分别以环磷酰胺、环磷琏胺加枸杞多糖为不同组，测定NK细胞杀伤活性和白细胞数量。 实验方案 1 .试剂 ①枸杞多糖枸杞(青海)，用20％乙醇回流提取， 蒸发浓缩，旋转薄膜干燥制成粉剂。 ②环磷酰胺 ③小鼠白血病细胞株(YAc—l细胞) 2 .实验动物 雌性BALB／C纯系小鼠，5—6周 实验分组及服药方法 1.正常对照组每只小鼠每天胃饲生理盐水0、2ml，连续20天。 2 .枸杞组分3个剂量组，每只小鼠每天分别胃饲0．1ml、0．2ml及0．3ml，枸杞多糖用生理盐水溶解，浓度为0．125g／ml[6]，连续20天。 3 .环磷酰胺组每只小鼠每6天腹腔注射环磷酰胺(30mg ／ kg)，共3次。 4 .环磷酰胺+枸杞组环磷酰胺同上法给药，同时每只小鼠连续20天每天胃饲枸杞多糖0 2ml(0.125g／ml )。 实验方法 NK细胞杀伤活性测定 采用LDH释放法，基本步骤为：小鼠脾细胞悬液，用5％小牛血清RPMI1640培养液调细胞浓度至2．5×10／ml 靶细胞采用体外传代的小鼠白血病细胞株YAC—l细胞(5×lO／m1)，小鼠细胞及靶细胞之比为50：1，加至96孔圆底板中，离心5min，37℃ 5％CO培养3h，加入预冷的RPMI 1640培养液50μl，离心5min，吸100μl上清液转移至另一96孔平底板中，加人LDH底液l00μl／孔，3min后加人lmol／L HcL(50μl／孔)终止反应，于自动酶标仪上读取波长490nm的OD值。 NK细胞杀伤活性