检测生物组织中的有机物.pptVIP

蛋白质的鉴定----双缩脲试剂 1、在做还原糖、蛋白质鉴定的实验时，为什么要留出一部分样液？ * 生物一轮复习 还原性糖+斐林试剂→砖红色沉淀 还原性糖： 葡萄糖、麦芽糖、果糖、半乳糖 非还原性糖：蔗糖、淀粉等 + → 0.05 g/mL的硫酸铜水溶液 选材时注意： 如果植物组织中积累的成分是淀粉和蔗糖，那就无法检测到还原性糖。 有些植物尽管含有较多的还原性糖，但如果本身含有叶绿素或其他色素，这些色素就会影响实验现象起到遮盖作用。这些都不适宜做实验材料。 苹果和梨是比较理想的实验材料。 苹果、研钵、小刀 斐林试剂A液、斐林试剂B液、二氧化硅 量筒、试管架、吸管、试管夹、试管、滴管 漏斗、纱布 火柴、酒精灯、三脚架、石棉网、烧杯 取一个洗净的苹果切下一块，去皮，然后切成小块，取一部分切成小块的苹果放在研钵中，加入少许二氧化硅（石英砂），然后研磨，将研钵中加入少量水继续研磨。 将玻璃漏斗插入试管中，在漏斗上垫一层纱布，将组织研磨液进行过滤，得到苹果的组织样液。 用量筒取两毫升组织样液，再用量筒取两毫升新配制好的斐林试剂。 取一只试管，将量好的苹果组织样液倒入试管中，然后将量好的斐林试剂倒入试管中，震荡试管使溶液混合均匀，我们可以看到此时溶液呈蓝色。 将这只试管放入盛有开水的大烧杯中，用酒精灯加热（控制温度在50-65度范围内）。 溶液的颜色开始是蓝色，然后慢慢变成砖红色。 溶液的颜色从蓝色变成砖红色。 苹果中含有还原性的糖。 选材：含糖量较高的白色或近于白色的植物组织(排除色素对 显色的干扰)，苹果、梨最好 。 实验流程(步骤) 1.可溶性还原糖 制备组织样液： 制浆：去皮、切块、研磨， 过滤：（用单层纱布） 取液：（２mL） 显色反应 现象： (用前混匀) 50～65.C水浴 加热2min 脂肪 + 苏丹Ⅲ → 橘黄色 脂肪 + 苏丹Ⅳ → 红色 取少量脂肪样液，加入苏丹Ⅲ，震荡，可看到溶液呈了橘黄色，本实验我们用苏丹Ⅲ做染液。 芝麻，脂肪含量丰富，但种子颗粒太小，不利于切片制作。 玉米，脂肪含量较少，种子颗粒也较小，因此也不适合做实验材料。 花生是比较理想的实验材料。 显微镜、镊子、毛笔、吸水纸、刀片、载玻片、盖玻片、培养皿 50%的酒精、苏丹Ⅲ、清水 取一粒浸泡过的花生种子，去皮，分开两片子叶，将子叶切成薄片，然后用毛笔将这些材料放入盛有清水的培养皿中。 取一片载玻片，用纱布擦净，用毛笔取一片最薄的材料，放在载玻片中央。 用滴管在花生种子薄片上滴几滴苏丹Ⅲ染液，染色2至3分钟，用吸水纸吸去花生种子薄片周围的染液。 在薄片上滴1至2滴体积分数为50%的酒精，洗去附色，用吸水纸洗去花生子叶周围的酒精。 在薄片上滴一滴清水，盖上盖玻片，制成临时装片。 在低倍镜下寻找花生种子薄片的最薄处，将这部分移至视野中央。 用显微镜观察花生种子薄片。 实验步骤： 取材：花生种子（浸泡３－４h），去皮，将子叶削成薄片 制片： ①选取最薄的薄片移至载玻片中央 ②在薄片上滴加苏丹Ⅲ(或苏丹Ⅳ) 染液2 － 3滴，染色 ２－３min ③滴加体积分数为50%的酒精溶液1—2滴，洗去浮色 (多余的苏丹Ⅲ ) ④吸去余液，滴1-2滴蒸馏水，盖上盖玻片，制成临时装片 显微观察： 先在低倍镜下找到已着色的薄片，后用高倍镜观察 现象： 有被染成橘黄色(或红色)的脂肪微粒 脂肪微粒 可以看到细胞中一个个圆形的小颗粒，这就是脂肪颗粒。 显微镜下观察到橘黄色的颗粒。 花生种子细胞中含有脂肪。 蛋白质 + 双缩脲试剂 → 紫色络合物 豆浆、蛋清、牛奶都是很好的实验材料。 本实验我们用蛋清做实验材料，在用蛋清做实验材料时，要注意将蛋清稀释，如果稀释不够，反应后的产物会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底。 试管架、试管、吸管 蛋清稀释液 双缩脲试剂A液、双缩脲试剂B液、量筒 用量筒量取两毫升的蛋清稀释液，取双缩脲试剂A液 将量取的蛋清液和双缩脲试剂A液分别倒入到试管中，震荡均匀，此时可见试管内仍然是透明的。 再向试管中加入1至2滴双缩脲试剂B液。 震荡均匀，此时可见试管内溶液呈紫色 蛋清液呈紫色。 蛋清液中含有蛋白质。 鸡蛋清溶液 NaOH 溶液 滴加CuSO2 溶液, 每次滴加均需摇匀 结果显示: 紫色 斐林试剂？ 淀粉的鉴定 取材：马铃薯匀浆 检测： 碘液2滴 现象： 摇匀后变成蓝色 作对照 2、使用双缩脲试剂时为什么B液只能加3～4滴而不能 过量？ 过量的双缩脲试剂B会与试剂A反应，使溶液呈蓝色，而掩盖生成的紫色。 3、为什么斐林试剂要现配现用，不能放置太久？ 时间太长，Cu(OH)2悬浊液就沉淀在试管底部而无法参与反应。 问题探讨: *