2013微生物检验员培训资料.doc

一. 基础知识 微生物基础知识 培养基 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。 琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固。但多次反复融化，其凝固性降低。 任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。 消毒与灭菌知识 5.2灭菌方法 灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物，灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。本实验主要介绍物理方法的一种，即加热灭菌。 加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。通过加热使菌体内蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的。蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关，含水量越高，其凝固所需要的温度越低。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强，可增加灭菌效力。  洁净室行为规范 实验室安全知识 二. 基本操作 （一）培养基配制、灭菌、使用和保藏 配制 1.1 按照培养基瓶签所示，准确称量一定培养基干粉于合适的容器，加纯化水溶解。 1.2 根据培养基对pH的要求，用5%NaOH或5%HC1溶液调至所需pH。 1.3 如需分装，应先加热搅拌，待培养基完全溶解并均一后进行。分装时注意不要使培养基沾染在管口或瓶口，以免污染。液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜。固体分装装量为管高的1/5，半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜；分装三角瓶，其装量以不超过三角瓶容积的一半为宜。 1.4 培养基经灭菌后，如需要作斜面固体培养基，则灭菌后立即摆放成斜面，斜面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜；半固体培养基灭菌后，垂直冷凝成半固体深层琼脂。 灭菌 2.1 按照培养基瓶签所示的灭菌条件（温度和时间）对配制好的培养基进行高压灭菌。配制好的培养基应在2小时内进行灭菌。 保藏和使用 3.1 液体培养基管 置专用不锈钢筒内， 2～25℃避光保存，3周内使用。在不锈钢筒贴标签，标明培养基名称、培养基配制日期、高压灭菌编号等信息。不同批次培养基不得置于同一不锈钢筒内。 3.2 平板和接触皿置专用不锈钢筒，标明培养基名称、制备日期、培养基的灭菌编号，用保鲜膜密封筒口后，2～25℃避光保存，3周内使用。不同批次平板和接触皿不得置于同一容器内。 3.3 培养基使用之前应预培养，合格后方可使用。 营养琼脂培养基：25-35℃，预培养3天。 硫乙醇酸盐液体培养基：25-35℃，预培养2天。 虎红琼脂培养基和改良马丁培养基：23-28℃，预培养3天。 消毒剂配制和使用 0.1%新洁尔灭溶液的配制和使用 1.1基准处方：5%新洁尔灭溶液20ml ＋ 注射用水980ml 1.2 作为手部和衣服浸泡消毒，设备、操作台面和洁净室六面擦洗消毒以及地漏消毒用，有效期为3个月。 2. 75%酒精的配制与使用 2.1 基准处方：95%乙醇790 ml ＋ 纯化水210 ml 2.2 作为消毒双手（手套），擦洗设备、操作台等表面消毒剂，有效期为14天。 3. 2%来苏儿（甲酚皂）溶液的配制和使用 3.1 基准处方：50%来苏儿（甲酚皂）溶液40 ml ＋ 纯化水960 ml 3.2 拖擦地面用，临用前配制。 甲醛熏蒸 作为环境空气和表面消毒剂。 操作步骤：关闭风机→无关人员撤出消毒区，操作人员戴防护手套和防毒面具→将设备及器具暴露于空气中→将盛有甲醛溶液的不锈钢饭盒置不锈钢台面→上层饭盒倒入需要体积的甲醛（10ml/m3，每只饭盒不得多于250ml），下层饭盒倒入300ml 95%或无水乙醇→点燃下层饭盒内乙醇，操作人员迅速离开→保留被消毒空间的甲醛气体至少8小时→消毒结束后，开启风机，直至消毒空间无甲醛刺激性气味，方可进入工作。 臭氧消毒 5.1 作为环境空气和表面消毒剂。 5.2 操作步骤：关闭风机→无关人员撤出消毒区，操作人员戴防护手套和防毒面具→将设备及器具暴露于空气中→设定消毒时间，开启臭氧法生器面→操作人员迅速离开→保留被消毒空间的臭氧气体至少8小时→消毒结束后，开启风机，直至消毒空间无臭氧气味，方可进入工作。 消毒剂交替使用 6.1 隔周交替使用0.1%新洁尔灭溶液和75%酒精进行手部消毒。 6.2 隔周交替使用0.1%新洁尔灭溶液和2%来苏尔溶液拖擦地面。 6.3 洁净区每月对空气消毒一次，甲醛消毒6个月一次，其余时间采用臭氧消毒。 微生物室设备