养阴活血方药对糖尿病大鼠肝脏线粒体琥珀酸脱氢酶和三磷酸腺苷酶的影响.docVIP

养阴活血方药对糖尿病大鼠肝脏线粒体琥珀酸脱氢酶和三磷酸腺苷酶的影响 　　[摘要] 目的 探讨养阴活血方药对糖尿病大鼠肝脏线粒体琥珀酸脱氢酶（SDH）和三磷酸腺苷酶（ATP酶）活性的影响。 方法 选取SD大鼠24只，随机分为三组：正常对照组，糖尿病模型组，中药干预组。除正常对照组外，其他两组腹腔注射链脲佐菌素（STZ）造糖尿病模型。正常对照组和糖尿病模型组自由饮水，中药干预组按人与动物间体表面积折算的等效剂量比值灌喂给药。造模成功后10周，股动脉放血，并取肝脏，提取大鼠肝脏线粒体，并测定SDH和ATP酶活性的变化，观察肝细胞线粒体超微结构。 结果 与正常对照组[（3.91±0.43）U/mgprot]比较，糖尿病模型组大鼠肝脏线粒体SDH[（2.31±0.27）U/mgprot]活性显著降低（P 0.01），Na+-K+-ATP酶[（0.57±0.18）U/mgprot]活性显著低于对照组[（2.39±0.28）U/mgprot]（P 0.01），Ca2+-Mg2+-ATP酶[（0.95±0.19）U/mgprot]活性显著低于对照组[（2.18±0.09）U/mgprot]（P 0.01），肝组织透射电镜观察：肝细胞线粒体空泡化，线粒体嵴、膜大部分融合、消失，粗面内质网脱颗粒现象明显。与糖尿病模型组相比，中药干预组SDH[（3.39±0.29）U/mgprot]、Na+-K+-ATP酶[（1.70±0.22）U/mgprot]和Ca2+-Mg2+-ATP[（1.75±0.09）U/mgprot]酶活性均有显著升高（P 0.01），肝组织透射电镜观察：细胞线粒体无空泡，损伤程度轻。 结论 养阴活血方药可有效提高大鼠肝脏线粒体SDH活性、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性，这可能是养阴活血方药对糖尿病大鼠肝脏线粒体保护作用机制之一。 　　[关键词] 糖尿病；肝脏；线粒体；琥珀酸脱氢酶；三磷酸腺苷酶；养阴活血方药 　　[中图分类号] R587.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）09（b）-0016-03 　　糖尿病（diabetes mellitus，DM）是严重威胁人类健康的常见内分泌代谢疾病，肝脏作为长期受高血糖刺激的脏器之一，肝脏与糖尿病的关系逐渐受到人们重视。糖尿病肝病是糖尿病的一种慢性并发症，其病因及发病机制仍未完全明了。糖尿病属祖国医学消渴证，阴虚为本[1]。养阴活血方药是经多年研究和临床试验的核心方剂[2]。琥珀酸脱氢酶（SDH）是线粒体内膜的结合酶，是连接氧化磷酸化与电子传递的枢纽之一，可为线粒体需氧和产能的呼吸链提供电子，是反映线粒体功能的标志酶之一[3]。三磷酸腺苷酶（ATP酶）是维持胞内离子内环境稳定和神经元兴奋性、冲动传导、突触传递的重要物质基础，为葡萄糖和氨基酸的摄取提供驱动力，维持细胞生命活动，也是反映线粒体功能的重要酶之一[3-4]。本研究在线粒体水平研究糖尿病大鼠肝脏的损伤作用，并且观察糖尿病大鼠肝脏线粒体中ATP酶和SDH活性的变化。同时采用养阴活血方药对糖尿病大鼠进行治疗，研究其对糖尿病肝病的防治作用，为临床应用提供实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　选用清洁级健康雄性SD大鼠，体重为250～300 g，24只，由河北省实验动物中心提供（动物合格证编号：809091）。 　　1.2 中药配方 　　养阴活血方药组成：熟地20 g、牡丹皮20 g、山药15 g、山茱萸10 g等。 　　1.3 主要仪器及试剂 　　血糖检测仪（购于强生公司），3K-15型高速冷冻离心机（Sigma公司），7200型可见分光光度计（上海尤尼柯公司），链脲佐菌素（STZ，Sigma公司），线粒体提取试剂盒（批、ATP酶测定试剂盒（批、SDH测定试剂盒（批均购自南京建成生物工程研究所，其余试剂均为国产分析纯。 　　1.4 实验方法 　　1.4.1 动物分组 4月龄健康雄性SD大鼠24只，适应性喂养1周后，随机分为三组：正常对照组（8只）；糖尿病模型组（8只）；中药干预组（8只）。 　　1.4.2 糖尿病动物模型制备及给药 除正常对照组外，其他两组腹腔注射STZ造糖尿病模型。各组正常饲料喂养，正常对照组和糖尿病模型组自由饮水，中药干预组按人与动物间体表面积折算的等效剂量比值灌喂给药。 　　1.4.3 取材 造模成功后10周，对各组大鼠进行称重，股动脉放血，并取肝脏，部分进行固定，其余立即放入液氮，-70℃保存备用。 　　1.4.4 ATP酶和SDH活性的测定 取一小块肝组织，称重，用匀浆介质制成10%组织匀浆，提取线粒体，然后测SDH活性、Na+