冬凌草甲素长循环固体脂质纳米粒的制备及对人胃癌SGC—7901细胞的抑制作用.docVIP

冬凌草甲素长循环固体脂质纳米粒的制备及对人胃癌SGC—7901细胞的抑制作用 　　[摘要] 目的 制备冬凌草甲素长循环固体脂质纳米粒（ORI-LSLN），并考察其理化性质和对人胃癌SGC-7901细胞的抑制作用。 方法 采用熔融均质法制备ORI-LSLN，并对其形态、粒径分布、电位、包封率和载药量等性质进行考察。以冬凌草甲素溶液（ORI）、冬凌草甲素固体脂质纳米粒（ORI-SLN）为对照，进行ORI-LSLN体外释放试验。采用MTT法测定ORI-LSLN对人胃癌SGC-7901细胞的抑制作用。 结果 制备的ORI-LSLN呈类球形，平均粒径112 nm，Zeta电位为-31.6 mV，包封率为90.4%，载药量为5.1%。体外释放结果表明，ORI-SLN和ORI-LSLN在释放初期并无显著区别，后期ORI-SLN释放较快，24 h基本释放完全，而ORI-SLN则需要36 h才完全释放，表现了更好的缓释效果。ORI-LSLN对人胃癌SGC-7901细胞具有较强的毒性作用。 结论 熔融均质法制备的ORI-LSLN包封率高、载药量大，工艺易于工业化，与ORI-SLN相比，ORI-LSLN更具有较好的抗癌药物缓释制剂潜力。 　　[关键词] 冬凌草甲素；长循环固体脂质纳米粒；体外释放；细胞毒性 　　[中图分类号] R283.6 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）06（b）-0013-04 　　冬凌草甲素是唇型科香茶菜属植物冬凌草Rabdosia rubescens（Hemsl.）Hara.中提取的一种贝壳杉烯二萜类化合物，具有较强的抗肿瘤活性，对人胃癌SGC-7901细胞、食道癌109细胞、肝癌BEL-7402细胞等多种肿瘤细胞均呈现较好的抑制作用[1]，而对正常细胞毒性较低[2]，目前临床多用于食管癌、贲门癌、肝癌、食道癌和胰腺癌的治疗[3]。虽然冬凌草甲素抗肿瘤作用显著，但由于冬凌草甲素的水溶性差[4]、半衰期短、生物利用度低和在水溶液中稳定性不好等原因，其临床应用受到限制，目前临床上使用较广的仅有癌得宁注射液。癌得宁注射液通过使用表面活性剂和有机溶剂来增大冬凌草甲素的溶解度，达到临床给药浓度，制剂刺激性较大，长期使用容易引发静脉炎等不良反应[5]。为解决上述问题，国内外已开展多种新剂型的冬凌草甲素注射给药研究[6-8]。固体脂质纳米粒作为近年来研究较多的药物载体具有很多优点，如可实现水不溶性药物静脉注射给药，包封药物具有提高药物具有稳定性和实现缓释给药[9-10]、降低药物毒副作用和靶向作用等优点[11-12]。本研究采用熔融均质法，在较高的温度下将冬凌草甲素包裹在固体脂质材料中，均质分散后迅速降温制成冬凌草甲素固体脂质纳米粒，并进一步在纳米粒上连接PEG链，增加药物在血液循环中的滞留时间，减少巨噬细胞的摄取和识别，提高药物的治疗作用，为开发冬凌草甲素新型给药系统提供试验依据。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器 　　AL204型电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；FJ-200 高速分散均质机（上海标本模型厂）；NS1001LZK纳米均质机（意大利Niro Soavi S.P.A公司）；RE-52型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；XW-80A旋涡混合仪（上海医科大学仪器厂）；Beckman Allegra 64R高速冷冻离心机（美国贝克曼库尔特有限公司）；DSHZ-300型水浴恒温振荡器（江苏太仓市实验设备厂）；Millipore 10K超滤管（美国密理博公司） ；Agilent 1100型高效液相色谱系统（美国安捷伦公司）；JEM-1200EX型透射电镜（日本JEOL公司）；Nano ZS型激光散射粒径分析仪（英国Malvern公司）；Model 500型酶标仪（美国Biomed公司）。 　　1.2 试药 　　冬凌草甲素（成都兰贝植化科技有限公司，批号： 100822，含量不低于98%）；单硬脂酸甘油酯（天津市博迪化工有限公司）；PEG2000-DSPE（美国Avanti公司）；泊洛沙姆188（德国巴斯夫公司）；蛋黄卵磷脂（德国Lipoid公司）；冬凌草甲素对照品（含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号：110721-200501）；人肺癌SGC-7901细胞株购自中国科学院上海细胞所；色谱纯甲醇（山东禹王实业有限公司）；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 ORI-LSLN的制备 　　采用熔融均质法制备冬凌草甲素长循环固体脂质纳米粒（ORI-LSLN）。先将高速分散均质机和纳米均质机控温（70±2）℃待用。称取处方量单硬脂酸甘油酯、卵磷脂、PEG2000-DSPE和冬凌草甲素以适量乙醇溶解，为有机相。将处方量F68溶于适量超纯水