加压提取与加热回流提取三七皂苷物抗氧化活性比较研究.docVIP

加压提取与加热回流提取三七皂苷物抗氧化活性比较研究 　　[摘要] 目的 探讨加压提取最佳优化工艺参数，比较加压提取与加热回流提取三七皂苷物抗氧化活性及抑菌活性。 方法 选取压力、温度、料液比、乙醇浓度、药材粒径5个工艺参数指标，采用均匀设计优化法，寻找最佳优化工艺参数，测定未加样品溶液（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼，DPPH）溶液、加入样品溶液后加DPPH溶液、DPPH溶液与样品溶液混合后的吸光度及抑菌活性，并与加热回流法进行比较。 结果 加压提取最佳优化工艺参数为：压力0.8 MPa、温度120℃、料液比1∶20、时间15 min、乙醇浓度80%、药料粒径80目；与加热回流提取法相比，加压提取法提取时间[（15.12±3.14）min比（312.25±85.41）min]显著降低（P 0.05）。 结论 在优化工艺参数的前提下，加压提取技术可以显著提高三七皂苷物有效成分的提取率，缩短提取时间，而且对皂苷类成分抗氧化活性和抑菌活性没有影响。 　　[关键词] 三七皂苷物；加压提取；均匀设计优化；最佳工艺参数；抗氧化活性 　　[中图分类号] R285 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）09（b）-0119-04 　　三七（Panax Notoginseng）为五加科人参属草本植物，是我国珍贵的特产中药，有着悠久的用药历史。皂苷是三七最主要的生物活性成分，具有散瘀止血、消肿定痛等功效[1-2]。目前，提取三七中皂苷成分的方法有水煎煮法、醇回流法、大孔吸附树脂法、微波提取法、超声提取法、超临界萃取等[3]。上述方法技术较为成熟，但存在或提取率低，或提取物生物活性差，或处于实验研究阶段难以大规模化的生产等缺点。因此，新技术的开发是我国中药产业发展的战略需求，同时也是中药现代化道路上不断探索的热点课题。 　　加压提取技术[4]是近年来发展起来的一项新兴提取技术，其原理是在密闭容器内，通过升高压力使提取溶剂在超过沸点的温度下仍保持液体状态。在中药提取过程中，通过施加一定的压力，使药材内部的细胞壁被破坏从而加速溶剂的扩散；同时，升高压力还能使溶剂在高于沸点情况下仍保持液体状态，改善溶剂的溶解性和选择性，从而提高浸出速度和浸出率，缩短提取时间，减少溶剂损耗[5]。 　　本文拟采用加压提取技术，从三七中提取皂苷成分，通过对提取压力、温度、时间、料液比、乙醇浓度、药材粒径等工艺参数的研究，运用均匀设计优化软件，得出最优回归方程及最佳提取工艺参数，并与加热回流提取法进行比较，探讨加压提取技术对三七皂苷物氧化活性及抑菌活性的影响。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器 　　采用美国Waters公司Waters2695/2996型高效液相色谱仪，瑞士Foss Tecator公司生产的1095knifetec样品研磨机，美国Dionex公司生产的ASE200型溶剂加速提取仪，上海亚荣生化仪器厂RE-52型旋转蒸发仪，上海博迅实业有限公司生产的GZX-9070MBE型干燥箱、Spx-250B-Z生化培养箱，上海分析仪器厂生产的UV757CRT紫外可见分光光度计。 　　1.2 试药 　　三七总皂苷标准品（中国药品生物制品检定所，批号：870-200001）；人参皂苷Rb1（中国药品生物制品检定所，批号：110704-200216）；人参皂苷Rg1（中国药品生物制品检定所，批号：0703-2000221）；乙醇、甲醇、乙腈均为色谱纯，乙醚、香草醛为分析纯；DPPH（美国sigma公司）；三七药材购自云南文山；大肠杆菌、枯草杆菌、四联球菌、金黄色葡萄球菌来自广东省深圳市龙华新区观澜人民医院药剂实验室。 　　2 方法 　　2.1 加压提取与加热回流提取 　　加压溶剂提取取三七药材粉碎成粗粉，准确称定40 g，置加压提取装置，取400 mL蒸馏水，在温度110℃、压力0.3 MPa下加压浸提30 min，浓缩药液到135 mL，醇沉浓度到60%，静置取上清液挥干；加热回流提取同样取三七药材粗粉40 g，加蒸馏水回流提取3次，剂量200 mL，合并滤液浓缩醇沉到60%，静置取上清液挥干。 　　2.2样品溶液的制备 　　准确量取三七粉3.0 g，加压溶剂提取，取提取液11 mL到25 mL容量瓶中，定容取液1 mL于试管中，正丁醇萃取3次，合并萃取液，水浴挥干，加0.2 mL香草醛-冰醋酸溶液和0.8 mL高氯酸，60℃加热15 min，冰水浴冷却后加5 mL冰醋酸，用光度计测定吸收度，以甲醇作空白对照，在最大吸收波长547 nm处测定吸光值，得到回归方程：Y=4.2008X-0.0009，相关系数r = 0.9992。 　　2.3 标准溶液制备 　　准确称取13 mg三七总皂标准品，置于25