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高山杜鹃组织培养中褐化控制的研究 　　摘 要：为降低高山杜鹃组织培养中外植体的褐化程度，实验对高山杜鹃组织培养中不同的外植体（顶芽、叶片、带腋芽的茎段）、不同的基本培养基和不同的抗褐化剂等进行了研究。结果表明，高山杜鹃不同的外植体褐化率不同，其中带腋芽的茎段的褐化率最低；活性炭对外植体褐变起到了很好的抑制作用，其中以添加1.0g/L的活性炭时外植体褐化率最低。 　　关键词：高山杜鹃；组织培养；褐化；抗褐化剂 　　中图分类号 S685 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2015）24-46-03 　　Abstract：To overcome the explants browning in tissue culture process of Rhododendron lapponicum，the different explants，different antioxidants and different basic mediums were tested in this study.The results indicated that the browning rate of different explant was different.Stem section with axillary buds had the lowest browning rate. Explants browning could be effectively prevented in the medium contained 1.0g/L activated carbon. 　　Key words：Rhododendron lapponicum；Tissue culture；Browning；Antioxidant 　　高山杜鹃（Rhododendron lapponicum）又名红山茶，是杜鹃花科高山常绿灌木或小乔木植物，多生长在海拔较高的山地阴坡上，花朵有白色、粉色、红色等多种颜色，色泽鲜艳，呈球形开放，作为礼品花和新兴的年宵花卉，深受人们的喜爱[1]。但是高山杜鹃含有黄酮类化合物、多酚类物质，在组织培养时其外植体容易产生褐化现象，使其生长、分化受到抑制，甚至死亡[2]。为此，本实验对高山杜鹃组织培养过程中褐化现象的控制进行了研究，以期为高山杜鹃组织培养提供技术依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 供试外植体材料采自安徽省霍山，取生长旺盛的高山杜鹃新生叶片、顶芽和带腋芽的幼嫩茎段，用水冲洗掉表面灰尘。在超净工作台上用浓度为1‰的升汞消毒8min，无菌水漂洗4次。 　　1.2 试验设计 　　1.2.1 不同外植体的褐化现象 外植体分别取新生叶片、顶芽、新梢上带腋芽的茎段，切取为大小适中的小块接种在1/4MS+TDZ0.2mg/L+IAA0.4mg/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L的培养基中培养，pH为5.5。叶片切成边长为1～1.5cm的正方形，带腋芽的茎段取大约1cm长。每种外植体接种20瓶，每瓶接入1个外植体，3次重复。 　　1.2.2 不同的基本培养基对高山杜鹃褐变的影响 切取长约1cm的带腋芽的幼嫩茎段分别接种于以下4种基本培养基中：Read、MS、1/2MS、1/4MS，每一培养基中都添加TDZ0.2mg/L+IAA0.4mg/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L，pH为5.5。每种培养基20瓶，每瓶接入1个带腋芽的茎段，3次重复。 　　1.2.3 抗褐化剂对高山杜鹃褐变的抑制 在1/4MS+TDZ0.2mg/L+IAA0.4mg/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L培养基中分别添加不同的的抗褐化剂：活性炭（O.5，1，1.5g/L）、聚乙烯吡咯烷酮PVP（0.4，0.8，1.2g/L），pH为5.5。每种培养基20瓶，每瓶接入1个带腋芽的茎段，3次重复。 　　1.2.4 培养条件 培养温度：22～24℃；光照时间：11h/d；光照强度：2 500lx。 　　1.3 统计分析 每隔4d观察并记录外植体的褐化及生长情况，36d后对数据进行统计分析。相关计算公式如下： 　　褐化率（%）=（褐变的外植体总数/接种的外植体总数）×100； 　　增殖系数=增殖的芽总数/接种的外植体总数。 　　褐化程度采用目测法：“+”表示轻度褐化；“++”表示中度褐化；“+++”表示重度褐化。 　　2 结果与分析 　　2.1 不同外植体的褐化现象 高山杜鹃在组织培养时用不同材料作为外植体其褐化程度不同。从图1可以看出，用新生叶片作为外植体时，20d后完全褐变，褐化率为100%，褐化程度非常严重，培养基表面产生了一种褐色物质；顶芽的褐变程度仅次之，其褐化率为73%；带腋芽的幼嫩茎段褐化率为57%。接种后