姜黄素对动脉粥样硬化家兔内皮祖细胞的影响.docVIP

姜黄素对动脉粥样硬化家兔内皮祖细胞的影响 　　[摘 要] 目的 观察姜黄素对动脉粥样硬化（AS）家兔血浆非对称性二甲基精氨酸（ADMA）及骨髓血内皮祖细胞（EPCs）的影响。方法 28只家兔分为3组，即对照组（喂食普通饲料）、模型组（喂食高脂饲料）和姜黄素组（喂食高脂饲料+100mg/kg·d-1姜黄素）。12周后，测定血总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL_C）、ADMA水平，计算主动脉内膜斑块面积，取主动脉弓做病理切片，采用密度梯度离心法分离兔骨髓血单个核细胞（MNCs）。用贴壁法测定EPCs黏附能力，改良Boyden小室法测定EPCs迁移能力及CCK_8法测定EPCs的增殖能力。结果 姜黄素组较模型组内膜斑块面积减少，差异有统计学意义（P0.05），血浆ADMA低，差异有统计学意义（P0.05），EPCs的黏附、迁移及增殖能力亦明显强于模型组，差异有统计学意义（P0.05，P0.01，P0.05）。结论 姜黄素能降低血脂和血浆ADMA水平，促进粥样硬化兔骨髓血EPCs活力，具有保护血管内皮和抗动脉粥样硬化作用。 　　[关键词] 动脉粥样硬化；姜黄素；非对称性二甲基精氨酸；内皮祖细胞 　　中图分类号：R54 文献标识码：A 文章编号：1009_816X（2013）04_0279_04 　　姜黄素（curcumin）是从姜黄中提取的一种酸性酚类物质，能减轻家兔动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）的病变程度，可能在多个环节上影响动脉粥样硬化的发生和发展[1，2]。非对称性二甲基精氨酸（asymmetricdimethylarginine，ADMA）为一种内源性NO合成抑制剂，SchulzeF等[3]研究认为，其为冠心病（CHD）的一个独立危险因素。内皮祖细胞（endothelialprogenitorcells，EPCs）是一类能增殖并分化为血管内皮细胞，但尚未表达成熟血管内皮细胞表型，也未形成血管的前体细胞。研究表明，EPCs不仅参与人胚胎血管生成，同时也参与出生后血管新生和内皮损伤后的修复过程。近来随着EPCs促进血管新生、修复损伤血管内膜作用的相继揭示，其在冠心病防治上的作用已经越来越受到重视[4，5]。本研究旨在通过复制AS家兔模型，观察其对ADMA及EPCs的影响，探讨姜黄素可能的抗AS机制。 　　1 资料与方法 　　1 材料与方法： 　　1.1 主要材料：日本大耳白家兔由温州医学院动物实验中心提供（浙医动字：2200300002），在实验中心饲养。胆固醇由上海国光生物有限公司生产；姜黄素由神威药业有限公司生产；NO试剂盒购自南京建成生物工程研究所。ADMA标准品，邻苯二甲醛衍生试剂（OPA），3_巯基丙酸、FITC标记的荆豆凝集素I（FITC_UEA_Ilectin）、人淋巴细胞分离液（Ficoll，密度110773）购于Sigma公司，高效液相色谱仪为Agilent1100系列。另备人纤维连接蛋白（Roche公司生产），血管内皮生长因子（PeproTechEC公司生产），培养基M199、胎牛血清、胰酶（Gbico公司生产），DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白（DiI_ac_LDL）（Molecularprobe公司生产），CCK28检测试剂盒（上海同仁化学研究所） 　　1.2 实验方法： 　　1.2.1 实验药品：采用高脂饲料即89%基础饲料、10%猪油、1%胆固醇复制AS动物模型。姜黄素为黄色粉末，实验前用0.5%羧甲基纤维素纳（CMC_Na）溶液配成浓度为10g/L的姜黄素/0.5%CMC_Na溶液混悬液（现配现用），供家兔灌胃用。 　　1.2.2 AS模型复制和分组：28只2～3个月龄健康雄性日本大耳白家兔，体重1.7～2.1kg。给予基础颗粒饲料适应性喂养1周，随机分为3组：正常对照组、模型组和姜黄素组。正常对照组予喂饲正常饲料，动脉粥样硬化模型组和姜黄素组给予高脂饲料喂养，每只家兔每日进食量均为150g，单笼喂养，饮水不限，连续喂养12周。在喂养过程中，正常对照组和模型组予单纯0.5%CMC_Na溶液10ml/kg体重灌胃，姜黄素组予10g/L的姜黄素混悬液按10ml/kg体重灌胃，每日一次（即100mg/kg·d-1姜黄素）。 　　1.2.3 取材：于高脂喂养第12周末，禁食12h，经耳中央动脉取血备用。20%乌拉坦20mL/kg腹腔注射，沿腹正中线切开，将主动脉从心脏与主动脉连接的位置及髂动脉分支处剪断，离体后纵向剪开主动脉，予10%中性福尔马林溶液固定，待苏丹IV染色及病理检查。 　　1.2.4 兔骨髓血EPCs的分离、培养：第12周末双侧胫骨平台穿刺抽取骨髓血，用密度梯度离心法获取单个核细胞，接种于包被有人纤维连接蛋白的24孔培养板中，每孔中加