常温下深度血液稀释后家兔脑组织TNF—α生成量的变化.docVIP

常温下深度血液稀释后家兔脑组织TNF—α生成量的变化 　　[摘要] 目的 即时监测深度血液稀释后家兔脑组织肿瘤坏死因子α（TNF-α）生成量的变化。 方法 健康成年家兔30只，随机分为5组（n=6），对照组（E组）不进行血液稀释；A、B组以6%羟乙基淀粉（130/0.4）行血液稀释，目标HCT分别为18%（A组）、12%（B组）；C、D组以4%明胶溶液行血液稀释，目标血细胞比容（HCT）同A、B组。左颈内静脉穿刺置管，以备采取血样；左股动、静脉穿刺置管以行急性等容性血液稀释（ANH）；右股动脉穿刺置管以备抽取血液样本及监测动脉压。股动脉放血，同时A、B组经股静脉约30 min输注等量6%羟乙基淀粉行ANH至目标HCT；C、D组经股静脉约30 min输注等量4%明胶溶液行ANH至目标HCT。于动、静脉穿刺置管后20 min（T0）及ANH后2（T1）、4（T2）、8 h（T3）时，分别采集右股动脉和左颈内静脉血样各0.4 ml，采用ELISA法测定脑组织TNF-α生成量。 结果 E组各时点脑组织TNF-α生成量比较，差异无统计学意义；A组血液稀释后4 h出现TNF-α浓度升高；B、C、D组血液稀释后2 h出现TNF-α浓度升高。 结论 以羟乙基淀粉及明胶溶液对家兔行深度ANH后，均出现脑组织TNF-α生成量逐渐升高；ANH目标HCT为18%时，明胶溶液组较羟乙基淀粉组早出现TNF-α生成量增加。 　　[关键词] 血液稀释；脑组织；肿瘤坏死因子 　　[中图分类号] R-33 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）09（b）-0005-03 　　脑缺氧后的炎症反应在脑损伤中起重要作用[1]，可引起炎性因子表达，中性粒细胞、单核细胞浸润，并导致神经元细胞坏死、水肿及脑软化。肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α，TNF-α）作为具有广泛生物学活性的细胞因子，近年来在脑缺氧损伤过程中的作用备受关注。颈静脉球与动脉血细胞因子含量的差值反映脑炎性因子的生成量，可作为反映脑炎症反应严重程度的指标[2]。适度的急性等容性血液稀释（acute normovolemic hemodilution，ANH）在一定程度上起到抗炎和脏器保护的作用，但极度ANH是否影响机体免疫系统，是否加重炎症反应仍有较大争议[3-5]。本实验通过监测不同时点脑组织生成TNF-α量，观察深度血液稀释下脑炎症反应的程度。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料 　　健康成年家兔30只，体重2～2.5 kg，随机分为5组（n=6），对照组（E组）不进行血液稀释；其余4组以6%羟乙基淀粉（130/0.4）或4%明胶溶液行血液稀释，A、B两组以6%羟乙基淀粉（130/0.4）行血液稀释，目标HCT分别为18%（A组）、12%（B组）；C、D两组以4%明胶溶液行血液稀释，目标HCT同A、B组。 　　1.2 血液稀释模型的制备 　　术前家兔禁食12 h，不禁水，以20%乌拉坦5 ml/kg静脉麻醉，行气切插管及机械通气，潮气量（VT）15 ml/kg、呼吸频率（RR）30/min、吸入氧浓度（FiO2）为40%，维持家兔肛温37℃左右。分离左颈内、外静脉分叉处，留置针逆向穿刺置管至颈静脉球部以上备抽取血液样本；左股动、静脉分离以行ANH；右股动脉穿刺置管以备抽取血液样本及监测动脉压。 　　穿刺置管结束后稳定30 min，自右股动脉、左颈静脉球各取血0.1 ml行血气分析，确定初始血细胞比容（HCT）值决定放血量。放血量计算公式：2×kg×Q×（HCT0-HCT1）/（HCT0+HCT1）。其中Q为每公斤体重所含体液毫升数，家兔为50 ml，HCT0为初始HCT，HCT1为目标HCT。按此公式并结合基础HCT、目标HCT行ANH，自左股动脉放血，同时经股静脉输入等容量的6%羟乙基淀粉或4%明胶溶液，过程约30 min。同时密切观察生命征，控制ABP及HR波动在基础值的10%左右。 　　于动脉、静脉穿刺置管后20 min（T0）及ANH完成后2（T1）、4（T2）、8 h（T3）分别自左颈静脉球部、右股动脉取血0.4 ml，立即离心（4500 r/min，20 min），取上清液于-20℃保存，以酶联免疫吸附测定方法（ELISA）检测TNF-α浓度。 　　1.3 数据处理 　　采用SPSS 13.0统计软件进行数据处理，计量以均数±标准差（x±s）表示，组内比较采用重复测量设计的方差分析，组间比较采用单因素方差分析，以P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 各组各时点动、静脉血TNF-α的比较 　　各时点E组TNF-α浓度比较，差异无统计学意义（P0.05）；A组T2～T3及B、