乙型肝炎实验室检测技术20141014讲述.ppt

乙型肝炎实验室检测技术 临床ELISA检验影响因素 临床ELISA测定现通常为采用手工操作的以微孔板条为固相的测定模式，测定操作非常简单，一般涉及到标本的收集保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面，其中任一步骤的不当都会影响测定结果，且尤以加样、温育和洗板等步骤为甚 一、临床标本的收集和保存 要注意避免出现严重溶血 样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染 血清标本如是以无菌操作分离，则可以在2～8℃下保存一周，如为有菌操作，则建议冰冻保存 冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融 标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时，应离心沉淀后取上清检测 二、试剂准备 实验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20分钟以上后，再进行测定 蒸馏水或去离子水应保证质量 三、加血清样本及反应试剂 加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡 四、温育 要保证在设定的温度下有足够的反应时间 温育温度的选择 “边缘效应”的排除 五、洗板 固相免疫测定技术是一种非均相免疫测定技术，需以洗涤操作将特异结合于固相的抗原或抗体与反应温育过程中吸附的非特异成份分离开来，以保证ELISA测定的特异性 六、显色 在加入底物开始显色反应前，最好是先检查一下底物溶液的有效性 临用前配制 七、比色 比色测定时，一定要注意酶标仪的波长是否已调至合适或所用滤光片是否正确 单波长或双波长比色选择的问题 临床ELISA测定中可能会出现的问题及可能的原因 * 病毒形态与基因结构 嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)正肝DNA病毒属 电镜：3种形态 HBV基因组和基因表达产物 3200 bp 4 open reading frames 7 proteins 大蛋白(preS1-preS2-S) 中蛋白(preS2-S) 小蛋白(HBsAg) 核衣壳(HBcAg) HBeAg 聚合酶 X蛋白 HBV carrier distribution in China in 1992 4-8% 8-12% 4-8% 海南 黑龙江 吉林 辽宁 山东 福建 江西 安徽 湖北 湖南 广东 广西 上海 河南 山西 内蒙古 陕西 宁夏 甘肃 青海 四川 贵州 云南 西藏 新疆 江苏 浙江 北京 台湾 over7% 3~7% Lower then3% HBsAg distribution in the year of 2006 No data Comparing of HBsAg prevalence between 1992 and 2006 age 世界 高流行区 ≥8% 中流行区 2～7% 低流行区 ＜2% 我国 农村城市 南方北方 中南和华东华北 地区分布 年龄和性别 高流行区 青少年和30～40岁的成人 中流行区 仍以成人感染为主 低流行区 多20～29岁年龄组发病高峰 职业 高危人群 医务人员 托幼机构儿童 妓女 静脉内滥用毒品者 男性同性恋者 家庭聚集性明显 人群分布 基因型 血清型 主要地区 A adw2, ayw1 北欧、西欧、非洲、美洲 B adw2, ayw1 东南亚、中国、日本 C adr, ayr, adw2 东亚、中国、日本、波利尼西亚等 D ayw2, ayw3 南欧、地中海、印度 E ayw4 西非 F adw4, adw2, ayw4 美国土著人、波利尼西亚、中南美 G adw2 美国、法国 H ? 尼加拉瓜、墨西哥、美国 HBV不同基因型和血清型的地区分布 Source: NNDSS/VHSP 经血传播 医源性传播 母婴传播 性接触传播 日常生活接触传播 传播途径 HBsAg 最早出现的血清学标志之一 是HBV感染的基本标志 HBsAg阳性见于 乙肝的潜伏期、急性期 慢性乙肝 病毒携带 与HBV感染有关的肝硬化和原发性肝细胞癌 抗原抗