rq-pcr检测遗传学标志.ppt

2年总生存率：移植前MRD阴性患者显著高于阳性患者（76.6% vs 30.2%）；2年DFS (74.8% vs 9%) 2年复发率：移植前MRD阴性患者显著低于阳性患者（17.6% vs 64.9%） 移植前MRD水平有助于提示移植预后 J Clin Oncol 2011; 29(11):1190-1197. 荷兰、英国多中心协作组，94例儿童AML患者 68%的患者可检出2个以上LAIP，26%的患者可检出1个LAIP，6%的患者无LAIP FCM检测LAIP在儿童AML患者中的应用 Leukemia (2010) 24, 1599–1606 随着巩固治疗的进行，MRD的水平呈逐渐降低的趋势 Leukemia (2010) 24, 1599–1606 诱导化疗后MRD水平可作为判断患者预后的独立因素，不同组别3年无病生存期或总生存期有显著差异 Leukemia (2010) 24, 1599–1606 一、FCM检测LAIP 二、RQ-PCR检测遗传学标志 一项406例APL的动态RQ-PCR检测结果显示，MRD持续阳性或由阴性转阳性为复发的指证 RQ-PCR检测PML-RARA基因的敏感性为10-3-10-5，BM检测的敏感性约为PB的1.5倍 MRC AML-15方案对APL患者每3个月进行PML-RARA检测，发现复发迹象后给予砷剂，复发率明显低于未常规进行MRD检测的AML 12方案组 RQ-PCR检测PML-RARA融合基因 J Clin Oncol 2009; 27:3650–3658. 动态RQ-PCR检测结果显示，AML1-ETO、CBFB-MYH11融合基因的表达水平与复发密切相关 经过巩固治疗后，在长期缓解的核心结合因子白血病患者中，常可检测到低水平的融合基因转录 以104个ABL1基因拷贝作为内参照， AML1-ETO融合基因持续低于10-12个拷贝预示患者可达长期缓解 RQ-PCR检测AML1-ETO、CBFB-MYH11对早期发现AML复发的意义 Blood 2010; 115:453-474 Ommen, H. B. et al. Blood 2010;115:198-205 RQ-PCR检测显示，多种AML分子标志在血液学复发前可观察到逐渐升高的趋势， CBFB-MYH11克隆的倍增时间（36天）长于AML1-ETO（14天）、PML-RARA（12天）、NPM突变（11天），提示其克隆增殖速度和分子水平复发的变化存在较大差异，CBFB-MYH11阳性克隆的倍增时间明显长于其他克隆 约75%AML患者可检测到WT1高水平表达，WT1是AML患者常用的MRD检测标志 Cilloni等通过系统性的分析和评估，最终选定于WT1基因的5’端设计引物，并对正常外周血、骨髓和504例AML患者进行了大样本研究 WT1基因作为MRD标志的价值 Current Opinion in Oncology 2010, 22:656–663 J Clin Oncol 2009; 27:5195–5201. 标准DA（7+3）诱导化疗后WT1基因表达水平下降2 log的AML患者复发率显著升高（p=0.004）， 提示WT1基因可作为诱导化疗后早期评价的指标 PB和PBSC的WT1基因表达为50/104 ABL拷贝，BM为250/104 ABL拷贝，PB的WT1基因表达背景低于BM（P0.001)，可能更适合作为标本来源 由于PB和BM的WT1基因表达背景较高，因此WT1更适合作为诱导化疗后早期评价的指标，作为长期微量MRD动态检测的敏感性不高 J Clin Oncol 2009; 27:5195–5201. FLT3-ITD、RAS和WT1突变在病程中不稳定，少数初诊时检出患者复发时突变可丢失 NPM1基因突变在AML患者中检出率近30%，80%为A型突变，疾病进展中也较稳定，可作为MRD的监测标志，敏感性可达10-5， 采用RQ-PCR进行的动态监测显示，80%血液学复发患者在平均97天前检测到分子水平的复发 NPM1突变由阴性转为阳性 或NPM1突变阳性的患者拷贝数上升1个数量级 基因突变在AML患者MRD检测中 的意义尚待积累更多的临床数据 Blood 2009, 114:2220-2231. 德国-奥地利AML多中心协作组 RQ-RT-PCR对245例伴有NPM1突变的AML患者（16-60岁）进行检测 232例（91%）患者诱导化疗后获得CR，80例患者接受allo-HSCT，146例接受2-3疗程中高剂量Ara-C为主方案，19例行auto-HSCT NPM1突变作为AML患者MRD标志的价值 J Clin Oncol 2011, 29:2709-2716 诱导化疗后，137例CR患者中，RQ-RT-