异氟醚预处理.ppt

围术期肝脏保护与吸入麻醉药的保护作用 东方肝胆外科医院麻醉科 俞卫锋 离体研究 　　　　1.异氟醚对鼠肝细胞缺氧／复氧损伤的保护作用 　　　　2.异氟醚对离体鼠肝缺氧／复氧鼠损伤的保护作用 3.乳化异氟醚对原代kupffer细胞氧化应激的影响 在体研究 　　　　4.异氟醚对鼠肝缺血再灌注复合内毒素损伤的影响 　　 　 5.HO-1在异氟醚预处理的肝脏保护中的作用 6.乳化异氟醚对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用 　　　　7.乳化异氟醚对肝脏缺血再灌注远隔肺损伤的保护作用 第一部分 离体研究 一、异氟醚对鼠肝细胞缺氧/复氧损伤的保护作用 离体肝细胞实验结论：临床剂量的异氟醚对长时间(90min)和短时间(30min)缺氧肝细胞均有能量保护作用，并有效改善复氧后的能量失衡状况。 。 缺氧30min可使肝细胞ATP／AMP之比和总腺苷酸水平下降；1 ~3MAC异氟烷明显升高ATP绝对值，同时降低AMP水平，增加总腺苷酸水平。 缺氧30 min肝细胞中能荷、ATP的下降与AMP的升高被异氟醚部分逆转，而被复氧完全逆转。 二、异氟醚对离体鼠肝缺氧/复氧损伤的保护作用 离体鼠肝缺氧60 min复氧15 min后，LDH 迅速增加，反映了缺氧一复氧所致的肝细胞损伤，而1 MAC、2 MAC异氟醚组明显降低了缺氧一复氧后LDH 的增加。 异氟醚对鼠肝缺氧60 min复氧即刻02-产生的影响 比较C组在SOD(一)和SOD(+)间的差异可明确：离体鼠肝复氧即刻可产生O2-爆发。对比C组和D组则发现：2MAC异氟醚可明显降低鼠肝复氧后O 2-的增加。 实验分组 主要结果 主要结果 主要结果 主要结果 第二部分 在体研究 实验分组 实验分组 3.肝组织匀浆iNOS的免疫印迹(western)分析　 实验分组 肝脏缺血再灌注 炎症细胞因子反应 中性粒细胞浸润 肝脏病理损害 异氟醚预处理 结论 再灌注期复合内毒素腹腔注射可明显加重肝损伤炎症因子反应 异氟醚预处理可明显减轻缺血再灌注复合内毒素性肝损伤及炎症反应 内毒素 主要结论 雄性SD大鼠随机分为5组缺血60分钟再灌注4小时（n=8） 二、HO-1在异氟醚预处理的肝脏保护中的作用 假手术(Sham)组 肝缺血再灌注组（I/R）组 异氟醚预处理-肝缺血再灌注（I/R-ISO）组, 肝缺血再灌注组-异氟醚预处理-HO-1抑制剂(Iso-Znpp)组 肝脏缺血再灌注-HO-1诱导剂(I/R-Hemin)组 1. 肝脏组织的病理改变 　　　HO-1组和ISO预处理组肝脏损害明显小于I/R组，提示HO-1诱导剂和ISO预处理可明显减轻肝脏缺血再灌注病理损伤 Sham I/R 2. 肝脏损害的生化指标的变化： 　　　 3.HO－1的免疫印迹(western)和免疫组化染色分析 　　　 Sham I/R I/R-ISO Iso-Znpp I/R-Hemin HO-1诱导剂 主要结论 HO-1阻断剂 HO-1活性↑ 异氟醚预处理 肝脏缺血再灌注 炎症细胞因子反应 中性粒细胞浸润 肝脏病理损害 30min 15min 30min 2h 脂肪乳预处理 C组 再灌注 阻断 间隔 脂肪乳预处理 KC组 再灌注 阻断 间隔 乳化ISO预处理 IP组 再灌注 阻断 间隔 乳化ISO预处理 IK组 再灌注 阻断 间隔 24h前GdCl3腹腔注射(抑制Kupffer细胞) 24h前GdCl3腹腔注射(抑制Kupffer细胞) 乳化ISO预处理 LA组 再灌注 阻断 间隔 乳化ISO预处理 LN组 再灌注 阻断 间隔 24h前L-Arginine腹腔注射(激活NOS) 24h前L-NAME腹腔注射(抑制NOS) 三、乳化异氟醚对大鼠肝缺血再灌注损伤保护 1. 各组再灌注2h后肝组织病理学改变 C组 IP组 KC组 LN组 LA组 IK组 * * * * * * # # # # * * * * 2. 肝脏损害的生化指标的变化： 　　　 A：C组；B：KC组；C：IP组；D：IK组；E：LA组；F：LN组。 乳化异氟醚预处理 肝脏缺血再灌注损伤 肝脏缺血再灌注损伤 肝脏缺血再灌注损伤 结论 1、Kupffer细胞直接介导了乳化异氟醚预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用，其作用机制可能与NO和iNOS水平有关。 2、乳化异氟醚预处理对肝缺血再灌注损伤的保护作用与单一因素（过高或过低水平的NO）没有关系，说明NO对大鼠缺血再灌注损伤的保护作用