第六章植物体细胞胚胎发生.doc.docVIP

第六章 植物体细胞胚胎发生 第一节 体细胞胚胎发生特点及方式 一、体细胞胚胎发生特点 植物胚胎发生（Somatic embryogenesis）从合子开始。自20世纪50年代末Steward等发现胡萝卜根细胞离体培养可通过体细胞胚胎发生形成再生植株以来，大量研究表明，大多数植物组织培养、单细胞悬浮培养、原生质体培养和花粉培养中都观察到体细胞胚胎发生或花粉胚胎发生。其中体细胞胚为二倍体的体细胞产生的胚状结构；而花粉胚（Pollen embryos）是由小孢子或其分裂产物等单倍体细胞产生的体细胞胚，可发育成单倍体植株。 体细胞胚或花粉胚都起源于植物组织培养中一个非合子细胞，是经过胚胎发生和胚胎发育过程而形成的胚状结构。体细胞胚是离体诱导过程中组织培养的产物，与无融合生殖胚明显不同，只限于组织培养范围使用；体细胞胚起源于非合子细胞，明显区别于合子胚；体细胞胚的形成经过胚胎发育过程，与组织培养器官发生途径中芽与根的分化不同。 植物体细胞胚胎发生和诱导器官发生相比具有明显的特点： ① 具有两极性：在体细胞胚胎发生早期就具有胚根和胚芽两极性的存在，胚性细胞第一次分裂多为不均等分裂，形成顶细胞和基细胞，继而由较小的顶细胞继续分裂形成多细胞原胚，而较大的基细胞经过少数几次分裂成为胚柄部分，在形态上具有明显的极性，发育过程与合子胚相似。体细胞胚一经形成，多数可生长为小植株，成苗率高。因此，常将发育一定时期的体细胞胚制作成人工种子，以达到快速繁殖优良种质的目的。不定芽和不定根则为单极性。 ② 存在生理隔离：体细胞胚形成后与母体植物或外植体的维管束系统较少连接，出现所谓生理隔离（Physiological isolation）现象，与器官发生途径完全不同（不定根或不定芽往往与愈伤组织的维管组织连接）。 ③ 遗传性相对稳定：体细胞胚是由那些未经过畸变的细胞或变异较小的细胞形成，并可以实现全能性表达，通过体细胞胚形成的再生植株变异小于器官发生途径形成的再生植株。正是基于体细胞胚的基因型与亲本相似，产生的后代植株表型也与亲本基本相同。因此，体细胞胚可以制作成人工种子，不仅加速繁殖，且可保持优良种质的遗传稳定性。器官发生途径再生植株一般要经过脱分化和再分化过程，诱导分化率和成苗率都较低，且芽和根的分化也需在不同条件下诱导，需要时间较长。 ④ 重演受精卵形态发生的特性：植物组织培养形态发生的几种方式中，体细胞胚胎发生途径是最能体现植物细胞全能性的一种方式，因为它不仅表明植物体细胞具有全套遗传信息，而且重演合子形态发生的进程（转引自崔凯荣，戴若兰，2000）。 二、体细胞胚胎发生方式 植物组织培养过程中体细胞胚胎途径可分为直接途径和间接途径两类。直接途径是指直接从原外植体不经愈伤组织阶段发育而成；间接方式是指体细胞胚从愈伤组织或悬浮细胞，有时也从已形成的体细胞胚的一组细胞中发育而成。如香雪兰（Freesia refracta）花序外植体经直接体细胞胚胎发生途径形成再生植株（转引自崔凯荣，戴若兰，2000）。 直接发生体细胞胚胎的来源细胞可以是外植体表皮、亚表皮、幼胚、悬浮培养的细胞和原生质体。一般认为直接方式发生体细胞胚是由原来就存在于外植体中的胚性细胞——预胚胎决定细胞（PEDCs）培养后直接进入胚胎发生而形成体细胞胚（Sharp WR，et al，1980），如柑桔属的珠心组织（体内或离体）可以通过预胚胎决定细胞直接进行体细胞胚的发生（Evans DA和Sharp WR，1981），而且是自然发生，有时甚至不需要借助外源生长调节剂的作用。在体细胞胚再生植株表皮细胞中含有预胚胎决定细胞，可以在合适条件下直接进行体细胞胚胎发生，如胡萝卜和石龙芮等。 在间接体细胞胚发生过程中，起始培养基中生长素或生长素/细胞分裂素的浓度，对启动已分化细胞恢复有丝分裂活性十分重要，而且对这些细胞成为胚胎发育状态的外遗传的重决定也很重要，之后这些细胞的胚胎发育还必须在诱导培养基上进一步 诱导。 间接体细胞胚胎发生中，外植体已分化的细胞先脱分化，并对进一步发育重新决定而诱导出胚性细胞——诱导胚胎决定细胞（IEDCs），进而形成体细胞胚。 第二节 体细胞胚胎的起源和发育成植株的能力 一、体细胞胚的起源 体细胞胚胎发生的直接途径和间接途径均存在起源问题，即是起源于单细胞还是多细胞? 迄今为止，一直存在不同的看法，但绝大多数研究都认为体细胞胚胎起源于单细胞。从多种植物中都观察到单个胚性细胞，有不均等分裂的二细胞原胚和均等分裂的二细胞原胚、多细胞原胚、球形胚直到成熟胚。如木豆幼苗叶片愈伤组织悬浮培养体细胞胚的形成起源于单细胞，并且观察到体细胞胚发育的各个时期（见图5.1）。仙人掌科体细胞胚的发育也起源于单细胞（见图5.2）。 a—胚性叶片愈伤组织；b—球形细胞；c—伸长细胞