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编号：[2006-04-30], 共页 承担单位：福建省农科院生物技术研究所 课题编号： 课题名称：水葫芦无公害防除技术开发 课题负责：刘波、刘建、杜文琴 子课题名： 子课题号： 子课题人： 子项目名： 试验项目：不同接菌方法试验水葫芦链格孢对水葫芦致病力 试验人员：葛慈斌 试验负责：葛慈斌 报告日期：2006年4月30日 计数月份：2006.4（5） 福建省农业科学院生物技术研究所 生物农药研究中心 电话: 0591 传真: 0591 1．试验目的 水葫芦链格孢（Alternaria eichhorniae）是水葫芦（Eichhornia crassipes）的一种病原真菌，具有被开发成水葫芦的生物防治剂的潜能。本研究中心从中国农科院引进11株水葫芦链格孢，拟用于进行水葫芦的防除试验。前次试验采用涂抹接菌法，试验了11个菌株对水葫芦的致病力，本次试验采用剪叶、针刺、注射、涂抹和喷雾等方法接种链格孢菌丝片段于水葫芦叶片上，观察其对水葫芦的致病力，以比较这些方法的优劣，现将结果报告如下。 2．试验方法 2.1 菌株和培养基 水葫芦链格孢Ae09菌株；马铃薯葡萄糖液体培养基。 2.2 水葫芦链格孢的培养 配制马铃薯葡萄糖液体培养基，分装于250 ml三角瓶，每瓶50 ml，高压灭菌；用打孔器打取链格孢菌片（Ф=0.6 cm）3片，接种到培养基内；28 ℃、180 rpm培养；7 d 后，将培养液抽滤，收集菌丝体，称重；用研钵将菌丝研磨成60 ~120 um长的菌丝片断，按菌丝湿重与无菌水（含0.05%的吐温80）1：10的比例，配制成菌丝悬液；用血球记数板计算菌丝悬液的菌丝浓度（计算结果为6.7×107 cfu/ml）。取少量菌丝悬液，涂布在PDA平板上，观察其生长状况是否正常。 2.3 接种和病症观察 采集生长旺盛的水葫芦，用自来水冲洗干净；采用下列方法（赵国刚，2000；方中达，1998）将菌丝接种在水葫芦叶片上。 2.3.1 剪叶法：手术剪用酒精灯燃烧灭菌，冷却，在中浸渍10s后，抽出手术剪，剪刀刃上汇集成滴状的液后，在剪叶，剪口长约；浸一次1张叶片 3．试验结果 试验结果见图1-18。采用剪叶、针刺、注射、涂抹和喷雾等5种不同方法接种链格孢菌丝片段于水葫芦上约5 d后，叶片都开始出现暗黑色或褐色病斑，病斑不局限于接菌处（如剪口，针孔），而是随机分布在叶片上，其中又以叶片边缘的病斑更多；随后，病斑扩大，联合在一起，呈不规则的条状或块状褐色病斑，中央部分坏死；至接种后20d，部分老叶片枯萎死亡，但各处理水葫芦又长出新的叶片。对照水葫芦在的症状表现与接种链格孢的水葫芦没有明显的差别。 图1喷雾法接种水葫芦链格孢1h后水葫芦 图2 喷雾法接种水葫芦链格孢10d后的水葫芦 图3 喷雾法接种水葫芦链格孢20d后的水葫芦 图4 针刺法接种水葫芦链格孢10d后的水葫芦 图5针刺法接种水葫芦链格孢10d后的水葫芦叶片 图6 针刺法接种的对照水葫芦（10d后） 图7针刺法接种的对照水葫芦叶片（10d后） 图8针刺法接种20d后的水葫芦（右为ck） 图9 剪叶法接种的对照水葫芦（10d后） 图10 剪叶法接种水葫芦链格孢10d后的水葫芦 图11 剪叶法接种链格孢20d后的水葫芦（左为ck） 图12 注射法接种的对照水葫芦（10d后） 图13 注射法接种水葫芦链格孢10d后的水葫芦 图14 注射法接种链格孢20d后的水葫芦（左为ck） 图15 注射法接种水葫芦链格孢20d后的水葫芦 图16 注射法接种的对照水葫芦（20d后） 图17 涂抹法接种水葫芦链格孢10d后的水葫芦 图18 涂抹法接种的对照水葫芦（10d后） 图19 涂抹法接种链格孢20d后的水葫芦（右为ck） 图20 在PDA平板上培养4d的水葫芦链格孢 4. 试验结论 本次试验采用不同方法接种水葫芦链格孢到水葫芦上，均能引起水葫芦发病，但接菌20d后，不同接菌方法引起的水葫芦病情严重度间没有明显的差别；另一方面，对照水葫芦也出现相近的症状及病情严重度，而且有同事从试验地附近的水葫芦病叶上分离到水葫芦链格孢，因此很难判断供试的水葫芦出现的病斑是由接种链格孢引起，还是存在于自然的菌株引起的，这仍需要进一步的试验来检测这些水葫芦链格孢对水葫芦的致病力。 参考文献 赵国刚．2000．水葫芦致病菌的筛选及链格孢Alternaria eichhorniae C416菌株的生物学特性．中国农业科学院硕士研究生学位论文 方中达．植病研究方法（第三版）．北京：中国