《2013两水相系统中蛋白质分配系数的测定.ppt

上课前： 每组清洗一个50ml容量瓶 用蒸馏水润洗后备用 不用烘干 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 两水相系统中蛋白质 分配系数的测定 指导教师：龚小雁 张秀萍 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 了解蛋白质在两水相系统中分配系数的测定方法。 一、实验目的和要求 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 本实验中： 二、实验原理 两水相系统： PEG/(NH4)2SO4 分配对象：糖化酶 蛋白含量测定方法：考马斯亮蓝比色法 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 两水相分配： 在两水相系统中，生物物质与成相组分之间通过疏水键、氢键和离子键等相互作用而不同程度地分配在两相中。 分配系数K ： 当萃取达到平衡时，蛋白质在上下两相中的浓度之比，对于固定的相系统，K为常数。 K = C上/ C下 相比R ： 上下相体积比。 R = V上/ V下 二、实验原理 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 二、实验原理 糖化酶： 生物大分子蛋白，α-１,４-葡萄糖水解酶。 黑曲霉经发酵制得 。 广泛用于酒、醋、味精等发酵工业中起糖化作用，将淀粉转化为葡萄糖 。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 考马斯亮蓝比色法： 常用的蛋白含量检测方法。 考马斯亮兰G-250是一种染料，酸性溶液中呈棕红色，与蛋白质结合后转为蓝色，595nm波长下有最大吸收值。低浓度范围内（0.01～1.0mg/ml），与蛋白质浓度的关系服从比尔定律。 二、实验原理 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 试剂： PEG400、蒸馏水、(NH4)2SO4、糖化酶、考马斯亮蓝、牛血清蛋白等。 器材： 移液管、刻度离心管+盖子、台秤、离心机、试管、50ml容量瓶、恒温水浴锅、分光光度计+比色皿等。 三、实验器材与试剂 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. （一）试剂配制（已配好） 考马斯亮蓝G-250溶液：精确称取50mg考马斯亮蓝，溶于10ml 95%乙醇中，并加入50ml 85% 浓磷酸，用H2O稀释定容至500ml。 牛血清蛋白溶液 （BSA）：精确称取0.012g左右的牛血清蛋白，加入0.105gNaCl,溶于少量蒸馏水中，然后，稀释定容至100ml，配成 120?g/ml的牛血清蛋白原液。 四、操作方法 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. （二）蛋白质在两相中的分配 10ml刻度 离心试管 (NH4)2SO4 固体1.30克 PEG400 2.00克 糖化酶2.00ml 水 台