《6其它色谱方法.ppt

色 谱 分 析 主讲：付大友 内容 §1 绪 论 §2 色谱理论基础 §3 色谱定性定量方法 §4 气相色谱分析 §5 高效液相色谱分析 §6 超临界流体色谱和毛细管电泳 §7 色谱联用简介 §8 计算机技术在色谱分析中的应用 §6超临界流体色谱和毛细管电泳 超临界流体色谱 毛细管电泳 §6-1 超临界流体色谱 超临界流体色谱的特点、性质与原理 超临界流体色谱仪的结构流程 超临界流体色谱流动相 超临界流体色谱的应用 超临界流体色谱法与其他色谱法比较 超临界流体色谱的特点 超临界流体：在高于临界压力与临界温度时，物质的一种状态。性质介于液体和气体之间。超临界流体色谱(SFC)，80年代快速发展，具有液相、气相色谱不具有的优点: （1）可处理高沸点、不 挥发试样； （2）比LC有更高的柱效 和分离效率。 超临界流体性质 原理 压力效应 SFC的柱压降大（比毛细管色谱大30倍），对分离有影响（柱前端与柱尾端分配系数相差很大，产生压力效应）； 超临界流体的密度受压力在临界压力处最大，超过该点，影响小，超过临界压力20%，柱压降对分离的影响小； 压力效应：在SFC中，压力变化对容量因子产生显著影响，超流体的密度随压力增加而增加，密度增加提高溶剂效率，淋洗时间缩短。 CO2流动相，当压力改变：7.0→9.0×106 Pa， 则： C16H34的保留时间 25min → 5min。 程序升压 超临界流体色谱的结构与流程 其中高压泵、进样器、检测器记录和温度控制装置与气相色谱或高效液相色谱类似，可采用气相色谱或高效液相色谱的部件，常用的检测器为氢火焰离子化检测器，其次是紫外-可见、荧光检测器 。 填充柱的超临界流体色谱柱可采用液相色谱柱，毛细管超临界流体色谱可采用气相色谱的交联毛细管柱，也可购买厂家专门制备的超临界流体色谱柱。 超临界流体色谱流动相 SFC的流动相：超临界流体；CO2、N2O、NH3 CO2应用最广泛；无色、无味、无毒、易得、对各类有机物溶解性好，在紫外光区无吸收；缺点：极性太弱；加少量甲醇等改性； CO2的超临界温度31.3℃，超临界压力为7.4MPa 超临界流体色谱的应用 1.聚苯醚低聚物的分析 色谱柱：10m× 63μm i.d. 毛细管柱， 固定相：键合二甲基聚硅氧烷； 流动相：CO2 ；柱温：120 ?C； 程序升压； 2.甘油三酸酯的分析 四种组分仅双键数目和位置不同，难分离； 色谱柱：DB-225 SFC毛细管柱； 流动相： CO2 ；从15MPa程序升压到27MPa；2.5hr完全分离 超临界流体色谱法与其他色谱法比较 （l）与高效液相色谱法比较 实验证明SFC法的柱效一般比HPLC法要高：当平均线速度为0.6cm·S-1时，SFC法的柱效可为HPLC法的3倍左右，在最小板高下载气线速度是4倍左右；因此SFC法的分离时间也比HPLC法短。这是由于流体的低粘度使其流动速度比HPLC法快，有利于缩短分离时间。 （2）与气相色谱法比较 出于流体的扩散系数与粘度介于气体和液体之间，因此SFC的谱带展宽比GC要小；另外，SFC中流动相的作用类似LC中流动相，流体作流动相不仅载带溶质移动，而且与溶质会产生相互作用力，参与选择竞争。还有，如果我们把溶质分子溶解在超临界流体看作类似于挥发，这样，大分子物质的分压很大，因此可应用比GC低得多的温度，实现对大分子物质、热不稳定性化合物、高聚物等的有效分离。 （3）应用范围的比较 下图描绘了SFC与其他色谱方法测定相对分子质量范围的比较。由下图看出SFC比起GC法测定相对分子质量的范围要大出好几个数量级，基本与LC法相当。当然，尺寸排阻色谱法（SEC）所测分子质量范围是所有色谱法中最大的。超临界流体色谱法被广泛应用于天然物、药物、表面活性剂、高聚物、多聚物、农药、炸药和火箭推进剂等物质的分离和分析。 §6-2毛细管电泳 毛细管电泳分析概述 毛细管电泳理论基础 毛细管电泳仪 毛细管电泳分离模式 毛细管电泳应用与进展 毛细管电泳分析概述 电泳定义 经典电泳 高效毛细管电泳 电渗现象与电渗流 毛细管电泳分离过程 毛细管电泳特点 电泳定义 在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象，称之为电泳。由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同，可实现分离。 1937年，Tiselius(瑞典)将蛋白质混合液放在两段缓冲溶液之间，两端施以电压进行自由溶液电泳，第一次将人血清提取的