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DNA重组技术的原理及步骤 第五组：郑桂贤 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 一、发展历史 1951年，美国学者E．莱德伯格等发现了噬菌体。1957年日本学者发现了抗药性质粒。 20世纪70年代初，生物化学研究的进展也为重组DNA技术奠定了基础 1978年，诺贝尔生医奖颁给发现DNA?限制酶的纳森斯、亚伯与史密斯时，斯吉巴尔斯基在《基因》期刊中写道：限制酶将带领我们进入合成生物学的新时代。 基因工程、遗传工程、分子克隆作为DNA重组技术的代名词被广泛使用。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 二、DNA重组技术的原理 1.目的基因的获取 2.克隆载体的选择与构建 3.外源基因与载体的连接 4.重组DNA导入受体菌 5.重组体的筛选 6.克隆基因的表达 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 三、 DNA重组技术的步骤 1. 分：分离目的基因 2. 切：对目的基因和载体适当切割 3. 接：目的基因与载体连接 4. 转：重组DNA转入受体菌 5. 筛：筛选出含有重组体的受菌体 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Recombinant DNA Technology ①从细胞中分离出DNA ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ②限制酶截取DNA片断 ③分离大肠杆菌中的质粒 ④ DNA重组 ⑤用重组质粒转化大肠杆菌 ⑥培养大肠杆菌克隆大量基因 ⑦重组体的筛选 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. （一）分：目的基因的获取  1. 化学合成法:较短的基因（60-80bp）用途：PCR引物 、测序引物、 核酸杂交探针、定点突变 2. 基因组DNA 、cDNA 3. 聚合酶链反应 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. cDNA文库 基因重组 反转录酶 mRNA cDNA 基因组DNA文库 限制性内切酶 基因组DNA 基因重组 转化细菌 体外包装 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 克隆载体的选择和构建  理想载体具备的条件：可转移性、复制功能、多克隆位点（广泛、特异）、显著的筛选标志，便于筛选和鉴定、安全性 常用克隆载体：质粒DNA、噬菌体DNA 、病毒DNA 质粒是存在于细菌染色体外的小型环状DNA分子；具有自我复制功能；带有抗性基因及表型识别等遗传性标记;经改造后具有多克隆位点。 pBR322是一个人工构建的重要质粒，有万能质粒之称。它是由pSF2124、pMB1及pSC101三个亲本质粒经复杂的重组过程构建而成的。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 多克隆位点 ori 复制起始点 遗传标记 Amp polylinker 质粒载体 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Pr