《FACS的原理及应用操作.ppt

四色FACS应用原理及实用操作  生物治疗研究中心   周春保 张晖  流式细胞术 流式细胞术（Flow Cytometry, FCM）是一种可以快速、 准确、客观，同时检测单个微粒（通常是细胞）的多项特性，并加以定量的技术，同时可以对特定群体加以分选 研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合成微球等 研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以定量 了解 了解 常 用 荧 光 素的应用 细胞收获--电压 细胞收获—电压和补长 样品处理--常见影响因素 细胞洗涤缓冲液 红细胞裂解液 细胞膜渗透液 细胞固定液 荧光抗体量 流式细胞仪不同显示图的比较 荧光单抗 IMK试剂合 CD3 FITC/PerCP；CD4 FITC/PE/PE-Cy5/APC；CD8 FITC/PE CD25 APC/PE；CD45RO APC/PE；CD56 FITC/PE Lin1 FITC,HLA-DR PerCP／PE，CD123 PE,CD11C PE CD45RA FITC；CD16 PE ,CD161 APC ,CD24 PE,CD19 PE,CD86PE CD80 FITC CD40 FITCCDPE,CD1a FITC GRANZYME A FITC,GRANZYME B FITC, Perforin FITC,foxp3 FITC/PE CD209 FITC (DCsign), CD3 PerCP-Cy7/CD4 FITC/CD8 PE(三色) CD3PerCP-Cy7/CD4 FITC /CD25 PE(三色) IgG1 PE/FITC/APC,IgG 2a FITC/PE, IgG2b-k FITC CellQuest分析软件应用 CellQuest简介 CellQuest是从流式细胞仪上进行获取和分析数据的通用软件 CellQuest可从流式细胞仪上获取3色或4色样品进行分析 CellQuset 是所有自动软件的基础SimulSET,MultiSET----- 工具板 1 关键词 实用操作 数据的分析-可信区间的设定--门 数据的分析-可信区间的设定-形态和活性 数据的分析-可信区间的设定-同型 数据的分析-可信区间的设定-目的细胞 数据的分析-可信区间的设定-表 * * Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 液流系统 光学系统 电子系统 分选系统 流式细胞仪的检测原理 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. FACSCalibur特点/优势 FACSCalibur 世界上分析速度超快的台式机（104细胞/秒） 独特的分送和浓缩系统，大大提高细胞应用率 双激光：488nm/635nm 四色荧光＋2散射光=6参数 了解 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 常见的荧光素荧光强度 APC＞PE＞PE-Cy5＞FITC＞ＰerCP Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 了解 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 应用 Evaluation only. Created with Aspose.Sli