《实用ELISA教程.ppt

Elisa 实用操作手册 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 给师弟科普ELISA基本步骤。与其写个文档，不如直接写帖子，反正工作量一样。我自己做ELISA也只是初学者，所以说得不对的地方，请大家多多指正。ELISA有白底（上图，不可拆）和黑空板子（可拆，8个一排，12排）。用吸光度（一般是450nm的OD值）来检测，就只能用白底的板子。黑底的板子可以用Lumin读数。第一步，拿到板子，还有封盖膜。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 第二步：用100ul包被抗体，包被好板子之后，轻弹混匀。将封盖膜的白色撕去，用透明有粘性的膜，贴在板子上，把膜压紧（贴膜是为了防止液体挥发，所以一定要把每孔黏牢）。室温孵育过夜。注意事项：1.如果一次只做一部分孔，贴膜可以剪刀剪开，只用一部分。保证膜可以把加液后的孔盖住就可以。2.加样时候，一定要保证每孔加样量完全一样。避免因为操作原因，每孔液体量有区别。ELISA比较敏感，操作误差会导致最后读数有不小的差别。3.加的样，保证样品加在孔底，不要粘在管壁上，减少孔与孔之间的差异。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 第二天早上，来洗掉包被液。注意事项：1. ELISA用的所有液体系统，记得一定要预先调PH值到7.2-7.4之间，最好按照说明书都无菌过滤过。1XPBS的PH值在7.68左右，仍然需要加盐酸调酸一点。Trizma base配出来，PH在9.98,必须调PH!否则ELISA中抗原抗体根本不能正常结合。蛋白对于PH值极度敏感。2. 无菌要求多高，现在不知道。建议无菌配好的液体放在4度冰箱保存。每次用之前，放在室温下至少15分钟。ELISA用的液体，室温的温度，效果比较好。洗包被液的时候，直接把板子翻过来，弃掉液体。在厚厚的吸水纸上，用力拍打板子，力求把孔中的液体完全弃干净。用WASH BUFFER洗涤三次。因为孔的最大容量是400UL,但是300UL基本就可以把孔覆盖满。所以，建议洗板子的时候，每孔加350ul左右。注意事项：1.每次洗涤的时候，尽量拍干孔中液体。这样洗涤得比较干净。2. 孔中没有液体时候，动作一定要快！！！ELISA包被后的孔，绝对不能干掉！否则非常影响结果。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 3.封闭。用是1%BSA in 1XPBS. 无菌过滤，4度保存，用之前放在室温复温。封闭液最好可以封闭全孔，所以每孔加300UL封闭液，室温1小时。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 20