第二代基因杂交捕获法检测高危型HPV—DNA在宫颈癌前病变筛查中的应用研究.docVIP

第二代基因杂交捕获法检测高危型HPV—DNA在宫颈癌前病变筛查中的应用研究 　　[摘要] 目的 探讨第二代基因杂交捕获（HC2）法检测人乳头瘤病毒（HPV）分型基因对宫颈癌前病变的诊断作用及意义。 方法 选择北京市顺义区妇幼保健院2009年1月～2012年1月不同年龄妇女宫颈脱落细胞标本2400例，采用HC2法检测高危型HPV-DNA，并与液基薄层细胞检测（TCT）进行对比，异常患者行病理组织学检查，以病理结果为金标准，比较HC2法与TCT的诊断效果。 结果 罹患宫颈癌及癌前病变的女性以青中年为主。TCT检查、HPV检测与病理的符合率是随病理级别的上升而上升。CINⅢ及宫颈癌与高危型HPV感染密切相关，其中以HPV16、18、58为主。 结论 高危HPV感染是宫颈癌及癌前病变发病的主要致病因子，HPV16型感染易导致宫颈高度病变；HPV-DNA联合TCT能最大程度地发现宫颈异常细胞并及时发现宫颈癌的诱因。 　　[关键词] 第二代基因杂交捕获法；人乳头瘤病毒；宫颈癌；基因分型；癌前病变 　　[中图分类号] R711.74 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）06（c）-0101-03 　　近年宫颈癌发病率逐年上升，并呈年轻化趋势。目前认为高危型人乳头瘤病毒（HPV）+长时间持续感染（一般为10～15年）=宫颈癌。由此可见，感染HPV并不可怕，关键是通过定期进行宫颈癌的早期筛查、早发现、早治疗[1]。宫颈癌病因十分明确，它的发生与HPV的感染有着密切的关系[2]，宫颈癌是唯一确定病因的癌症，就是由HPV感染引起的[3]。故第二代基因杂交捕获法（HC2）检测对宫颈癌的预防与早期诊断有着重大的意义。本研究对不同年龄妇女宫颈脱落细胞标本采用HC2、液基薄层细胞（TCT）检测，现将结果报道如下： 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选择2009年1月～2012年1月北京市顺义区妇幼保健院门诊机会性筛查的宫颈疾病患者并按自愿原则采用TCT联合HPV基因分型检测的不同年龄妇女2400例宫颈脱落细胞标本，年龄25～55岁，平均（39.64±8.24）岁。所有患者均有性生活史，无急性生殖道炎症，无子宫切除等病史，无妊娠、无盆腔放射治疗史，基本排除混杂因素。纳入标准：①年龄在25～55岁曾有过性生活史的妇女。②知情同意，自愿参与该项研究，配合临床调查。 　　1.2 检测指标 　　1.2.1 第二代基因杂交捕获技术检测 采用美国Digence公司的HC2技术试剂盒，利用对抗体捕获信号的放大和化学发光信号的检测，一次性检测操作和结果判读按试剂盒要求进行，21种HPV分为高危型和低危型2类，高危型15种，包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68，低危型6种，包括HPV6、11、41、42、44、81，有2型或2型以上者为多型感染（不论是高危型或低危型）。具体如下：①DNA双链释放并分解成核苷酸单莲；②DNA单链与RNA组合探针结合为RNA-DNA杂交复合物；③捕获特异性抗体与DNA-RNA杂交复合物并固定在微孔壁上；④第二抗体与RNA杂合体结合反应；⑤冲洗并收集信号；⑥判读结果。RLU/CO≥1.0即为阳性结果，即相对于标本中检出的DNA负荷量≥1.0 ng/L，反之为阴性。 　　1.2.2 TCT检测 采用美国新柏氏公司TCT技术取材制片。由细胞病理学主治以上专科医生阅片，按2001年国际癌症协会TBS分级系统作出诊断报告。①正常范围。②意义不明的不典型鳞状细胞和腺细胞（ASC-US、AGUS）。③不除外高度鳞状上皮病变不典型鳞状细胞（ASC-H）。④低度鳞状上皮内病变（HSIL）。⑤鳞状细胞癌和腺癌。本研究将低度鳞状上皮内病变（LSIL）以上定为细胞学异常。 　　1.2.3 病理组织学诊断 专人负责对TCT异常和HPV阳性和患者进行阴道镜下宫颈多点活检及宫颈管搔刮组织病理学诊断。在阴道镜图象异常区及碘实验阴性区多点活检，如为正常转化区，则在转化区3、6、9、12时点处取活检。 　　1.3 统计学方法 　　采用统计软件SPSS 13.0对数据进行分析，正态分布的计量资料以均数±标准差（x±s）表示，计数资料以率表示，采用χ2检验。以P 0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 受检阳性者年龄分布 　　共526例出现阳性结果，其中HPV（+）者426例，患者发病年龄以25～44岁为主；TCT（+）者89例，患者发病年龄以35～55岁为主；HPV和TCT均（+）者11例，占2.09%。因此，本地区宫颈疾病多发于青中年。 　　2.2 TCT异常与宫颈活检的比较 　　89例TCT异常者中，随着宫颈活检病理级