《活性检测.pptVIP

下载本文档

7
0
约6.89千字
约 33页
2016-12-29 发布于北京
举报
版权申诉

《活性检测.ppt

1、本文档共33页，可阅读全部内容。
2、有哪些信誉好的足球投注网站（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

QA 关于噬菌体污染表达产物AKP蛋白的检测 1. 菌体加入15mL匀浆液 2. 超声破碎：输出功率1200w，超声2秒，间隔10秒，超声次数：40次 3. 粗匀浆制样：细胞破碎液 200uL ＋ 4x 样品处理液100uL + 匀浆缓冲液100uL 90℃变性5min，室温保存准备SDS电泳用。 4. 匀浆上清制备：另取1.0 mL细胞破碎液，4℃, 12000rpm×10min离心，留上清液 5. 上清液制样：匀浆上清 200uL ＋ 4x 样品处理液100uL + 匀浆缓冲液100uL ，90℃变性5min，室温保存准备SDS电泳用。 SDS的浓缩效应电泳体系为不连续体系电泳缓冲液与凝胶中的缓冲液不同凝胶也由PH、凝胶孔径均不相同的两层胶组成电荷效应：Cl－的快速泳动在其后面形成低电导、高电压梯度区带动Pr－和Gly－快速泳动，这样在高电压与低电压区形成界面，Pr－浓缩成狭小薄层 SDS的变性作用 SDS在溶液中能破坏蛋白质分子内和分子间的非共价键 β－巯基乙醇或二硫苏糖醇（DTT)的作用使蛋白质分子中的二硫键打开 ∴ 二者的作用使蛋白质变成单亚基并结合上SDS形成蛋白质－SDS复合物由于SDS带有大量的负电荷，掩盖了蛋白质原有的电荷 SDS与蛋白质的结合，改变了蛋白质原有的构象，变成了近似于长椭圆棒，其短轴长度一样，而长轴与分子量大小成正比 ∴ SDS中，SDS－蛋白复合物的迁移率不再受蛋白的电荷和形状的影响，而只与蛋白质的分子量正相关-分子筛效应 * 处理：1、环境用漂白粉灭菌； 2、用消毒液浸泡相关器具；3、菌种室甲醛熏消一夜；4、福尔马林溶液浸泡； 5、更换或交替使用发酵剂；6、采用抗性菌株；特征：1、培养液变澄清；2、养份没有被正常消耗； 3、噬菌斑：菌液涂板后出现溶菌透明圈，即噬菌斑；污染原因：菌体自带噬菌体 (特别是溶源性细菌); 环境中存在； Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 基因的克隆与表达专题之八 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. AKP,大肠杆菌碱性磷酸酶 (大肠杆菌碱性磷酸酯酶，EC.3.1.3.1) 在碱性环境下:水解多种磷酸单酯化合物需要镁和锰离子为激活剂关于AKP (E.coli alkaline phosphatase） Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 沉降系数(单体) 沉降系数(二聚体) 沉降系数(四聚体) 固有粘度电泳迁移率等电点等离子点摩擦比率 MWw MWz MWZ+1 吸光率(278nm for 1mg/ml) 激活剂抑制剂热稳定性 6.0 at pH8.0 6.2S 9.6S 3.4cm3/g 3.3×10-5cm2/V sec at pH7.6 pH 4.5 pH 6.3 1.05 (67-98)×103 at pH8.0 (88-99)×103 at pH8.0 (86-110)×103 at pH8.0 0.72 Mg2+，Mn2+，Zn2+，Ca2+ 氰化物, 焦磷酸盐 85℃加热30分钟仍保留活性，Mg2+存在时可增加酶的热稳定性 AKP的理化性质 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 蛋白检测指标 1、质活性分子量定性结构 2、量表达产率获得产量蛋白浓度纯度根据蛋白的特性 Western，测序等电泳，分子筛，沉降系数等光/色谱，晶体衍射等分光，凯氏定氮等电泳，沉降、晶体衍射等 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pt