《生物硕士毕业答辩4.ppt

研究背景 脂肪细胞中发现的唯一与肥胖呈负相关性的特异性血浆蛋白。肥胖、冠心病、Ⅱ型糖尿病患者血浆中的脂联素低于正常水平。 编码人脂联素的apMI基因定位于染色体3q27上，长度为16kbp，包含3个外显子和2个内含子 。 人脂联素由244个氨基酸组成 ，由分泌信号序列、特异序列、胶原重复序列、球状序列等4个结构域组成，其中球状区(gADPN)是脂联素生物活性的关键部位。 目的及意义 可作为冠心病、糖尿病的辅助诊断依据，并对疾病发生进行有效的预警； 可作为评价药物在治疗肥胖、冠心病和糖尿病疾病方面的效果； 进一步研究脂联素作用机制提供方便； 利用基因工程方法制备脂联素定量检测试剂盒中的标准品，提高了稳定性和生物安全性。 方法与结果（一） 人脂联素基因去信号肽区的克隆与鉴定 方法与结果（三） 创新与结论 成功构建了含有脂联素去信号肽区域的重组质粒pET-41a/ΔSADPN，实现了脂联素的可溶性表达； 制备脂联素定量检测试剂盒中的标准品，建立了人脂联素ELISA定量检测方法； 本实验所建立的人脂联素ELISA定量检测方法与国内上市同类产品的检测结果具有高度一致性，可用于临床检测。 致谢 本论文是在王云龙老师的悉心指导和亲切关怀下完成的，在此谨向导师表示深深的谢意和崇高的敬意！ 向培养我的母校和传授我知识的全体老师致以崇高的敬意，向研究生处的领导和老师们表示衷心的感谢！ 特别感谢河南省生物工程技术研究中心的各位老师和师兄师姐的指导和帮助！感谢所有关心帮助我的同学和朋友！ 感谢河南省重大科技攻关项目（项目编号 3110）对本论文的资金支持。 * 脂联素基因去信号肽区原核表达及酶免检测方法研究 专 业： 微生物学 学 生： 孙强 导 师： 王云龙 教授 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 主要内容 研究背景 目的及意义 实验技术路线 方法与结果 创新与结论 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 脂联素(adiponectin) Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 本研究建立的血浆脂联素酶免定量检测方法—— Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 实验技术路线 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 方法与结果（一） 总RNA浓度= OD260×稀释倍数× 40μg/ml OD280=0.254，OD260=0.485 RNA含量=0.485×1×40=19.4μg/mL 纯度=OD260/OD280=0.485/0.254=1.910 人脂肪组织总RNA的提取 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 方法与结果（一） 2、PCR扩增目的基因(678bp ) M.DNA Marker DL 2000； 1.PCRproduct ; 2.Negative control 3、重组质粒酶切鉴定 M.DNA marker DL 2 000; 1. BamHⅠ+XhoⅠ digestion products bp M 1