《电泳仪器操作课.ppt

电泳仪器操作 主要内容 电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统和微波炉的作用，工作原理，操作关键技术，以及注意事项。 电泳原理 电泳的定义：带电粒子在电场的作用下，向着与其电性相反的电极方向移动的现象。 电泳的基本原理：不同的物质在一定的电场强度下，由于所带电荷不同，因此受到的引力不同，向相反电极泳动速度不同进而达到分离目的。 电泳技术：利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。 电泳的作用：主要用于蛋白质、核酸、同工酶、氨基酸、多肽等物质的分离；还可用于对分离物质的纯度和分子量的测定。 电泳的分类 根据电泳分子的大小分为： 凝胶电泳：主要用于小蛋白质分子和核酸分子的分离 毛细管电泳：主要用于糖类和大蛋白分子的分离 根据电泳方法，大致可分为3类： 显微电泳 自由界面电泳 区带电泳：应用最广泛 电泳的分类 区带电泳按支持物的物理性状不同，可分为： (1）纸电泳：支持物为滤纸; (2）粉末电泳：如纤维素粉，淀粉，玻璃粉电泳； (3）凝胶电泳：如琼脂，琼脂糖，硅胶，淀粉胶，聚丙烯酰胺凝胶电泳； (4）缘线电泳：如尼龙丝，人造丝电泳 区带按支持物的装置形式不同，区带电泳可分为： (1）水平板电泳：支持物水平放置，是最常用的电泳方式； (2）垂直板电泳：聚丙烯酰胺凝胶可做成垂直板式电泳。 (3）柱状（管状）电泳：聚丙烯酰胺凝胶可灌入适当的电泳管中做成管状电泳。 电泳的分类 根据蛋白质分离的目的分为： 单向电泳：只在聚丙烯酰胺凝胶上分离。适于分离种类较少的蛋白。 双向电泳：第一向使用预制胶条进行蛋白质的等电聚焦分离，第二向将胶条中经过第一向分离的蛋白质转移到聚丙烯酰胺凝胶上，根据蛋白质的分子量大小与第一向相垂直分离。用于蛋白质的分离，可将提取的蛋白质混合物中数千种蛋白质同时分离开。 单向与双向电泳条带比较 电泳实验过程 水平板电泳： 制胶——插试样格（梳子）——取试样格——点样——电泳——染色——凝胶成像（对电泳结果进行观察记录和分析）。 垂直板电泳： 连续电泳：直接灌分离胶 配制凝胶溶液——灌胶—— 不连续电泳：灌分离胶——浓缩胶 ——插试样格——取试样格——点样——电泳——染色——脱色——成像观察和记录。 仪器一、电泳仪 作用：在电泳中提供电压与电流。 1、电泳仪的分类 根据电泳仪的电压范围可将电泳仪分为3类： （1）常压电泳仪（600V）：用于净电荷和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳； （2）高压电泳仪（3000V）：用于载体两性电解质等电聚焦电泳和DNA测序； （3）超高压电泳仪（3000～5000V）：用于毛细管电泳。 根据控制程序分为： 单恒（恒压）、双恒（恒流和恒压）、三恒（恒流、恒压、恒功率）。 (不论是单恒、双恒、还是三恒，仪器工作时任何情况下只能稳U、I、P中的一种参数)。 梯度电泳仪(用于土壤微生物的分离） 生物分析仪（微流控芯片电泳仪） 2、操作方法 这里以我们实验室常用的北京六一仪器厂生产的DYY-12型电脑三恒多用电泳仪为例说明。 U、I、P的有效输入范围： U：4-1000v（常压电泳仪） I： 4-500mA P：4-300w 可以同时连接4组电泳槽（并联），此时应选择稳压输出，当接多个电泳槽时，则仪器显示的电流数值为各槽电流之和。 （2）按键操作 C、﹝清除﹞键：可以清除有反显提示的参数数值。如果输入错误，可以按﹝清除﹞键，再重新输入。 D、﹝启动﹞键：确认参数无误后，启动电泳仪输出程序。 E、 ﹝+﹞键：在输出情况下递增反显U、I、P、T的数值；每按一次递增一个数字，弱按住不放，则连续快速递增。 F、﹝-﹞键：在输出情况下递减反显U、I、P、T的数值；每按一次递减一个数字，弱按住不放，则连续快速递减。 G、﹝继续﹞键：当电泳过程中出现人为中断停机，并希望继续接着输出工作，可以按﹝继续﹞键，此后电泳仪接着前面的工作时间继续工作。 工作结束时，仪器显示“End”，并连续蜂鸣提示，此时可按任意键止闹。关掉电源，拔出电源连接线。 （3）电源参数设定原则 显示屏 V： 0 v u=100v ︱ Mode: STD I： 0 mA I=50mA ︱