《细胞骨架的观察.ppt

* * * * * * * 大连理工大学 环境与生命学院 * * 细胞骨架的观察 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室 1.实验目的 熟悉免疫化学方法的原理及操作步骤。 掌握掌握考马斯亮蓝R250染色法及观察细胞内微丝的方法。 掌握用间接免疫荧光法显示细胞内微管的方法。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室 2. 实验原理 2.1 免疫组织化学技术 2.2 细胞骨架的观察 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室 2.1 免疫组织化学技术 免疫组织化学(Immunochistochemistry) 是利用免疫学抗原抗体反应的原理，用带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对组织细胞内特定抗原进行定性、定位和定量研究的一项新技术，又称免疫细胞化学(immunocytochemistry)。 免疫组织化学技术具有特异性强、灵敏度高、定位准确和简便快速等优点，又能够同形态、功能及代谢等研究结合起来，用以研究其它技术（如化学、生化、免疫及生理等）难以深入的领域。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室 免疫组织化学的过程 （1）抗原的提取与纯化； （2）免疫动物或细胞融合，制备特异性抗体以及抗体 的纯化； （3）将显色剂与抗体结合形成标记抗体； （4）标本的制备； （5）免疫细胞化学反应以及呈色反应； （6）观察结果。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室 免疫荧光法 免疫荧光法分为直接法和间接法。 直接法：将荧光素（最常用异硫氰酸荧光素、FITC）标记在特异性抗体上，使其直接与细胞上相应抗原结合，在荧光显微镜下观察即可鉴定未知抗原。 间接法：将荧光素标记在第二抗体上，待一抗与细胞抗原结合后，再用标记了的二抗与一抗相接，从而显示未知抗原。间接免疫荧光法中具有2对抗原、抗体系统。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室 2.2 细胞骨架的观察 细胞骨架(cytoskeleton)是真核细胞细胞质中错综复杂的蛋白质纤维网络，按纤维直径、组成成分和组装结构的不同分为微丝(microfilaments，MF，5～7nm)、微管(microtubule，MF，20～25nm)和中等纤维(intermediate filaments，IF，8～11nm)。 目前观察细胞骨架的手段主要有电镜、间接免疫荧光技术、酶标、组织化学等。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 生物科学与工程系细胞生