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检验科微生物室学习分享 目录 抗菌药物的作用机制 常用抗菌药物简介 真菌微生物检验的操作流程 2013年CHINET细菌耐药监测情况 一.细菌的分类与命名 细菌的分类：1.以细菌的形态和生理生化特征为依据的分类2.用化学分析和核酸分析，以细菌大分子物质（核酸，蛋白质）结构的同源程度进行分类 分类等级：界，门，纲，目，科，属，种 细菌分类系统：国际上普遍采用伯杰分类系统 现在使用的是《伯杰鉴定细菌学手册》第9版 革兰氏阴性菌 革兰氏阳性菌 临床常见的致病菌 G+：金葡菌、表皮葡萄球菌、α溶血链球菌（草绿色链球菌等）,β型溶血链球菌（A组和B组),非溶血性链球菌、肺炎链球菌、肠球菌属，产单核细胞李斯特菌等。 G--菌: 奈瑟球菌、不动杆菌属（鲍曼不动杆菌、洛菲不动杆菌） 、假单胞菌属（铜绿假单胞菌和其他）、布鲁菌属、百日咳杆菌、军团菌属，肠杆菌科细菌（大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、变形杆菌属、肠杆菌属、伤寒沙门菌、沙门菌属、志贺菌属、鼠疫杆菌等） 、流感嗜血杆菌，脆弱拟杆菌、核酸杆菌，破伤风芽孢杆菌、产气荚膜杆菌、肉毒杆菌、艰难梭菌，弧菌科，结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌。 其他病原微生物：放线菌属、诺卡菌属，立克次体属、支原体属、衣原体属、各种病毒、某些原虫（疟原虫、弓形体等）和各种真菌等。 二.细菌微生物检验的一般操作流程 标本的采集与处理 标本的显微镜检查（细菌的形态检查） 细菌的分离培养与接种 细菌的鉴定（生化反应，血清学鉴定等，不常见的细菌会用到细菌自动鉴定仪) 药敏试验 向临床发送报告 临床标本采集与处理 标本采集的一般原则： 1.早期：病程早期，急性期，未使用抗菌药物之前 2.无菌：要确保无污染菌 3.根据目的菌的特性用不同的方法采集：例如，尿液标本，疑为厌氧菌感染，要用无菌注射器行膀胱穿刺术抽取尿液 4.采集适量的标本（血培养瓶大人5-10ml,儿童1-3ml) 5 .注意自身安全 常见标本的采集 血液标本：严格无菌操作，用0.5%的碘伏消毒瓶盖和静脉采血部位（先注入需氧瓶，后注入厌氧瓶），不得放入冰箱，应立即送检。 尿标本：嘱咐病人留取早晨清洁中段尿,留尿前应仔细清洗会阴部，将前段尿排去，中段尿留取约10-20ml，直接排入专用的无菌杯中。 痰标本：（漱口）晨痰为佳，用力咳出呼吸道深部的痰，吐入无菌标本杯。应大于1ml。 粪便标本：采集脓血，粘液部分2-3g,外观无异常的大便应从不同部位取材，放入无菌杯中。 标本的处理 标本的处理：对环境敏感的细菌（如脑膜炎奈瑟菌 ，淋病奈瑟病等应保温并立即送检）。其他标本最好在采集后2h内送检。若不能及时送检，标本应在一定环境下保存，如支气管洗液，心包液，痰，尿等标本应在保存在4℃环境中。 标本的显微镜检查 1.不染色细菌标本的检查 2.细菌染色标本的检查： (1)革兰染色：细菌学中最经典，最常用的染色方法，可将所有细菌分为G＋G－ （2）抗酸染色：大多数为非抗酸性细菌，所以只针对麻风病，结核病的细菌检查 （3）荧光染色：敏感性强，效率高且容易观察 细菌的分离培养与接种 培养基的选择 1.血平板：适合各类细菌的生长，一般细菌检验标本的分离，都接种此平。 2.巧克力血平板：含V和X因子，适合苛养菌的生长，如嗜血杆菌，奈瑟菌，肺炎链球菌等。（大巧添加了万古霉素，抑制了G+菌的生长。 3.麦康凯平板：供分离发酵乳糖的革兰氏阴性肠道杆菌。（粪便） 4.XLD:主要用于分离志贺氏菌属，亦可用于分离沙门氏菌。（粪便） 5.CLED:（胱氨酸乳糖无电解质培养基）:无抑制性，用于泌尿系统致病菌的分离和培养（尿标本的接种） 6.罗氏培养基：用于培养结核分枝杆菌。 7.营养肉汤：各类标本及细菌的增殖。 各类培养基图片 各类培养基图片 细菌的接种 1平板划线法：一般细菌的接种，及分纯都使用此方法。 2.斜面接种法：用于单个菌落的纯培养，保存或者观察细菌的某些特性。 3.液体接种法 4.涂布接种法：常用于纸片法药物敏感性试验。 细菌的鉴定 细菌鉴定用到的各类生化反应： 1.糖类的发酵试验 2.七叶苷水解实验 3.吲哚试验 4硫化氢试验 5.枸橼酸盐试验 6.氧化酶试验 7.触酶试验 8.凝固酶试验等等...... 抗菌药物敏感性试验 3.E-text法：该方法结合扩散法和稀释法的原理和特点，操作简便如扩散法，但可以同稀释法一样直接定量测出药物对待检菌的MIC。 抗菌药物敏感性试验 结果的测量 科玛嘉琼脂培养基 细菌分布情况 其中：肠杆菌科细菌占所有分离菌株的44.8％ ， 其中最多见者依次为大肠埃希菌、 克雷伯菌属、 肠杆菌属、 变形杆菌属； 不发酵糖革兰阴性杆菌占所有分离菌株的26.7％ ， 其中最