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色谱技术 基础化学实验技能培训专题讲座 讲授内容： 色谱技术基本理论 纸层析 薄层层析 柱层析 色谱技术 基本理论 2．展开剂的选择 薄层吸附色谱展开剂的选择与吸附柱色谱洗脱剂的选择相同，极性大的化合物需用极性大的展开剂，极性小的展开剂用以展开极性小的化合物。一般情况下，先选用单一展开剂如苯、氯仿、乙醇等，若发现样品各组分的比移值较大．可玫用或加入适量极性较小的屣开剂如石油眯等。反之．若样品各组分的比移值较小，则可加入适量极性较大的展开剂试行展开。在实际工作中，常用两种或三种溶剂的混合物作展开剂，这样更有利于调配展开剂咸极性，改善分离效果。通常希望Rf值在0.2～0.8范围内，最理想的Rf值在0.4～0.5之间。 在此过程中，选择合适的展开剂是至关重要的。一般展开剂的选择与柱色谱中洗脱剂的选择类似，即极性化合物选择极性展开剂，非极性化合物选择非极性展开剂。当一种展开剂不能将样品分离时，可选用混合展开剂。表2-1给出了常见溶剂在硅胶板上的展开能力，一般展开能力与溶剂的极性成正比。混合展开剂的选择请参考柱色谱中洗脱剂的选择。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 实验仪器和试剂 仪器： 薄层板、毛细管、尺、铅笔、层析缸、电吹风 试剂： 5％待分离液（鼠李糖和葡萄糖）、展开剂、显色剂 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 操作流程 称取5g硅胶G 制作薄层板 加8ml蒸馏水 层析缸中展开 毛细管分别点样 吹干展开剂 喷洒显色剂 比较样品和标准样的Rf值 50mm×200mm玻璃板 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 1、薄层板的制备（湿板的制备） 薄层板制备的好坏直接影响色谱的结果。薄层应尽量均匀且厚度要固定。否则，在展开时前沿不齐，色谱结果也不易重复。在烧杯中放入2g硅胶，加入5—6ml蒸馏水，调成糊状。将配制好的浆料倾注到清洁干燥的载玻片上，拿在手中轻轻的左右摇晃，使其表面均匀平滑，在室温下晾干后进行活化。本实验用的吸附剂为硅胶G，用0.5%的羧甲基纤维素钠水溶液调成浆料。 2、点样 先用铅笔在距薄层板一端1cm处轻轻划一横线作为起始线，然后用毛细管吸取样品，在起始线上小心点样，斑点直径一般不超过2mm。若因样品溶液太稀，可重复点样，但应待前次点样的溶剂挥发后方可重新点样，以防样点过大，造成拖尾、扩散等现象，而影响分离效果若在同一板上点几个样，样点间距离应为1cm。点样要轻，不可刺破薄层。 实验步骤 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 3、展开 薄层色谱的展开，需要在密闭容器中进行。为使溶剂蒸气迅速达到平衡，可在展开槽内衬一滤纸。在层析缸中加入配好的展开溶剂，使其高度不超过1cm。将点好的薄层板小心放入层析缸中，点样一端朝下，浸入展开剂中。盖好瓶盖，观察展开剂前沿上升到一定高度时取出，尽快在板上标上展开剂前沿位置。 4、显色 凡可用于纸色谱的显色剂都可用于薄层色谱。薄层色谱还可使用腐蚀性的显色剂如浓硫酸、浓盐酸和浓磷酸等。对于含有荧光剂（硫化锌镉、硅酸锌、荧光黄）的薄层板在紫外光下观察，展开后的有机化合物在亮的荧光背景上呈有色斑点。也可用卤素斑点试验法来使薄层色谱斑点显色。 5、计算比移值（同纸层析） Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 注意事项 1、所用玻璃板应洗净不挂水珠，光滑平整。 2、铺板要均匀，厚度适宜，并于室温下晾干后在110℃活化30分钟，置于有干燥剂的干燥箱或干燥器中备用。