western_blot_试剂准备.doc

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1. 30%储备胶溶液: 丙烯酰胺(Acr)? ?? ?? ?? ? 29.0g 亚甲双丙烯酰胺(Bis)? ?? ???1.0g 混匀后ddH2O,7℃溶解,定容至100ml,棕色瓶存于室温。 2. 4×分离胶缓冲液(1mol/L Tris-HCl PH8.8) Tris?18.17g加ddH2O溶解,浓盐酸调PH 8.8,定容至100ml。 3. 4×浓缩胶缓冲液(0.5mol/L Tris-HCl??PH 68)? ? Tris?12.1g加ddH2O溶解,浓盐酸调PH 6. 8,定容至100ml。 4. 10%SDS:电泳级SDS 10.0g加ddH2O,68℃助溶,浓盐酸调PH 7.2,定容至100ml。 5. 5×电泳缓冲液(PH 8.3):? ???Tris? ?? ? 15.2g ? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ? 甘氨酸? ? 94g?? ? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ? ddH2O? ? ??定容到1000ml ? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ? SDS? ? ? 5g   先在974ml蒸馏水中加入Tris碱,待溶解完全后,再加甘氨酸,最后加SDS。 6. 10%过硫酸铵(AP):0.1g AP加ddH2O至1.0ml,4℃保存,要在一周内使用,最好新鲜配制。 7. 2×加样缓冲液:2×SDS加样缓冲液    0.5mol/L Tris-HCl (PH 6.8)? ?2ml    10%SDS? ?? ?? ?? ?? ?4 ml    β-巯基乙醇? ?? ?? ?? ?1ml    甘油? ?? ?? ??? ?? ? 2ml    1%溴芬蓝? ?? ?? ?????1ml    置4℃避光保存 8. TEMED:注意室温较低时TEMED量可加倍,最后灌胶之前再用 9. 转膜缓冲液(Towbin transfer Buffer):即1×SDS 10. 0.01mol/L PBS (PH 7.4) :? ?? ?NaCl? ?? ?? ?? ???8.5g    (12H2O)Na2HPO4? ???2.9011g    (2H2O)NH2PO4? ?? ?? ?0.24g    加ddH2O定容至? ?? ? 1000ml 11. 封闭液:? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ???1×PBS中加入? ?? 30ml     5%(V/V)脱脂奶粉? ?? ??1.5g    0.02%叠氮钠? ?? ?? ? ? 0.006g    0.05%Tween-20? ?? ?? ? 0.015g 12. 漂洗液(PBST):含0.05% Tween-20的PBS溶液    每1000 ml PBS溶液中加0.5 ml Tween-20 13. 水饱和正丁醇: 正丁醇? ? 50 ml ddH2O? ? ? ?5 ml? ? ?加入瓶中震荡,使结合,存于室温。用时取上面一相加在凝胶上面。 14. 考马斯亮蓝染色法试剂:一般用G250考马斯亮蓝(蛋白定量专用) 染色液: 90 ml甲醇:水(1:1,V/V)和10 ml冰乙酸的混合液中溶解G250马斯亮蓝0.25g,用Whatman 1号滤纸过滤染液以去除颗粒状物质。(染色液多次回收利用)脱色液:90 ml甲醇:水(1:1,V/V)和10 ml冰乙酸的混合液 15. 丽春红S染色色法试剂:2%乙酸,     0.5%丽春红的水溶液 脱色液:TBS 16. Aprotinin:为一58氨基碱性多肽,经反复冻融后,会发生集聚,储存液应分装成小份,保存于-20度,每一小份用后应予废弃。 17. PMSF:在溶液中不稳定,应在临用前从储存液中现加于裂解液中。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF,应立即用大量的水冲洗。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF通常配成10mmol/L浓度储液(1.74或17.4mg/ml溶于异丙醇中)保存于-20度。 18. 显色液:联苯胺显色液(DAB)      DAB? ?? ?? ?? ?? ???2ml      10%H2O2? ?? ?? ?? ? ? 60μl      PBS(0.1mol/L PH6.4)? ?10ml 19. 三去污裂解缓冲液 ? ?? ?0.5mol/L Tris-HCl(PH 8.0)? ?? ??? 0.785g/100ml ? ?? ?0.15mol/L??NaCl? ?? ?? ?? ?? 0.8775 g/100ml ? ?? ?0.02%叠氮钠? ?? ?? ?? ?? ??0.02 g/100ml ? ?? ?0.1%SDS? ?? ?? ?? ?? ?? ?? 0.1 g/100ml 超级详

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