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论文实例：大鼠附睾特异表达基因Binlb和Bin2a的克隆及其表达调控研究 作者简介：李鹏，男，1971年12月出生，1996年09月师从于中国科学院上海生命科学研究院张永莲教授，于2001年08月获博士学位。摘要 附睾是精子成熟、贮存和受到保护的场所。在睾丸中完成形态分化的精子细胞进入附睾，在通过附睾的过程中，获得了前向运动能力和受精能力。这些能力的获得，是精子表面与附睾区域性表达的基因在管腔中造 成的微环境不断相互作用的结果。另外，各种性传播疾病、男性不育一直是威胁人类生殖健康的、全球性问题。人口危机也对安全避孕，尤其是男性避孕也提出了新的要求。因此，对男性生殖机理的研究受到越来越多的重视。 近来，我们实验室在大鼠附睾头部先后克隆了两个基因。其中，Bin1b的全长cDNA为385，编码一个68个氨基酸的多肽。它是一个单拷贝基因，有一个大小约为1.3kb的内含子。在18种不同的组织中，Bin1b只在大鼠附睾头部有表达，表达的组织专一性很高。并且它只表达在附睾头部中段的上皮细胞中。另外，Bin1b在大鼠发育到性成熟时，表达水平最高，并在整个性成熟期维持较高的表达水平。同源性分析表明，它很有可能是哺乳动物体内的一种先天性免疫效应分子b-defein家族中的一员，在灵长类中也有同源分子存在。与香港中文大学合作，利用附睾上皮细胞的体外培养及反义核酸技术证明了它的抗菌性。同时，Bin1b的表达可以被附睾炎症上调。 Bin2a的全长cDNA为2606,编码637个氨基酸。Bin2a的氨基酸序列中包括Glycosylhydrolasesfamily35家族中的9段相对保守的序列,其中包括210位的活性中心Glu（protondonor）,但是缺少另外一个活性中心，279位的Glu（nucleophile）。并且，Bin2a与大鼠附睾中报道的酸性b-半乳糖苷酶显然不同。所以，Bin2a可能是b-半乳糖苷酶家族的新成员。Bin2a表达受雄激素上调，其表达的组织专一性也很高，只在大鼠附睾有表达，并主要在附睾头部。与Bin1b不同的是，Bin2amRNA的水平在45天时，有一个表达高峰。 Bin1b和Bin2a的克隆，为研究附睾中的粘膜免疫过程以及精子成熟提供了线索。 关键词：附睾，精子成熟，男性避孕，b-defein，b-半乳糖苷酶 Atract Epididymisisreoibleforermmaturation,storageandprotection.ermatozoathatemergefromthetesteshadtotraversetheepididymistoacquiremotilityandfertility.Theacquisitionresultsfromtheinteractionbetweenermandtheoptimalmicroenvironmentcreatedbygeneswhichareregionallyexpreedandregulatedalongtheepididymaltubule.Additionally,sexuallytramitteddisease,maleinfertilityandmalecontraceptionremaiworld-widehealthproblem.Somoreattentioarepaidontheresearchofmalereproductivetract. Ourlabhaveclonedtwogenesinthecaputofratepididymisrecently.Thefull-lengthcDNAofBin1bis385,encoding68aminoacid.Itisasingle-copygeneandhasa1.3kbintron.Of18organtiues,Bin1bmRNAwasonlyfoundintheepididymisandconfinedtoepithelialcellsinthemiddlepartofthecaputregion.Itwasdevelopmentallyregulatedanditsexpreionstartedat30daysofageandreachedamaximumduringthesexuallyactiveperiod,andthen,decreasedintheagedrats.Bysimilarityanalysis,Bin1bisprobablyanewmemberofmamalianb-defeinfamilywhichisinvolvedinhostiateimmunity.Andithashomologsinprimate.Itsantimicrobialactivity