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论蛋黄卵磷脂的纯化及含量的测定
文章标题:论蛋黄卵磷脂的纯化及含量的测定
摘要:采用柱层析的方法对提取的卵磷脂进行纯化,用消化定磷法测定卵磷脂的含量。结果表明,从蛋黄提取的卵磷脂粗品经柱层析纯化,精制卵磷脂的纯度达99.6。用消化定磷法可以准确测定卵磷脂的含量,有较高的准确度。
关键词:卵磷脂;纯化;含量;测定
1引言
卵磷脂又称为磷脂酰
胆碱,是磷脂酸的衍生物,由甘油与脂肪酸和磷酸胆碱结合而成。卵磷脂广泛分布于动物、植物和酵母中。卵磷脂是构成细胞等生物膜、脑组织和神经组织的重要组成成分[1],对酶的活性也起重要的作用,而且也是乙酰胆碱的重要供给源[2]。卵磷脂因为其乳化特性和安全性,可用于生产人工血浆、脂乳剂。临床上可用于治疗动脉粥样硬化、脂肪肝、神经衰弱、营养不良、胆固醇结石的防治药物及静脉注射脂肪乳的乳化剂。在食品、化妆品和医药领域有着广泛的用途。
目前,卵磷脂的来源主要是从鸡蛋黄、大豆和猪脑中提取。传统提取卵磷脂的几种方法,如用二甲醚从生蛋黄中提取卵磷脂、用乙醇和酸类从生蛋黄中提取卵磷脂、用丙酮提取卵磷脂和冷冻蛋黄,用乙醇和己烷将卵磷脂与中性脂进行分离,提取卵磷脂等方法,这些方法提取的卵磷脂达不到食品和医用的高纯度[3],因此,必须对粗产品或市售的卵磷脂进行纯化。在本工作中,作者采用柱层析的方法对提取的卵磷脂进行纯化,用消化定磷法测定卵磷脂的含量。
2实验部分
2.1试剂和仪器
蛋黄卵磷脂(卵PC)(自提);中性三氧化二铝(200-300目);硅胶G;氯仿(AR);甲醇(AR);乙醚(AR);浓硫酸(AR);钼酸铵(AR);30过氧化氢(AR);磷酸二氢钾(AR);层析柱(Ф15cm,L40cm);紫外检测仪(自制);台式平衡记录仪(上海大华仪表厂);分光光度计(日本岛津);EYELASB-2000旋转蒸发仪(上海EYELA有限公司)。
2.2实验方法和结果
2.2.1蛋黄卵磷脂的提取
取12克蛋黄置于150mL的锥型瓶中,加入35mL乙醚,搅拌10min,放置20min,过滤,于45oC的条件下,用旋转蒸发仪蒸干乙醚,再放入真空干燥器减压干燥20min,彻底除尽乙醚,粗提取物离心10min,取出下层的卵磷脂,约为2克。
2.2.2蛋黄卵磷脂的精制
在层析柱中装入25克中性三氧化二铝为固定相,将1克提取的卵磷脂溶于氯仿,以9:1(V/V)的氯仿:甲醇为洗脱液,紫外检测仪接台式平衡记录仪监测收集第二组分[4],在氮气气氛中旋转蒸干洗脱液得精制的卵磷脂0.6克,充氮气冰箱保存。经过精制的卵磷脂用硅胶G板薄层检验只有一个斑点。
2.2.3卵磷脂含量的测定
标准曲线的绘制:用消化定磷法测定卵磷脂的含量。按表1中的数据娶浓度为5.718mg/mL的磷酸二氢钾标准溶液于小离心试管中,各加入0.5mL5mol/L的硫酸,于150-160oC的烘箱中消化3小时,冷却,加入30的过氧化氢两滴继续消化1小时,冷至室温,加入4.6mL0.22的钼酸铵溶液,再加0.2mLFSR试剂,于100oC水浴上加热7min,于室温下于810nm测定吸光度A,结果列入表1。
样品的测定:同法测定测定卵磷脂的吸光度,通过回归方程求得卵磷脂中磷的含量,按卵磷脂的摩而质量即可求得卵磷脂的含量。用消化定磷法测定精制卵磷脂的纯度达99.6。
表1消化定磷法的标准曲线数据
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No1234567
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KH2PO4/ml0.000.501.001.502.002.503.00
KH2PO4/μg0.0002.8595.7188.57711.4414.3017.15
P/μg0.0000.6521.3031.9552.6063.0253.909
A0.0000.0940.2100.3340.4500.5600.675
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回归方程为:Y=0.1753X―0.01072R2=0.9964
3结论
采用柱层析的方法对提取的卵磷脂进行纯化,精制卵磷脂的纯度高,可达到食品和医用要求的高纯度。用消化定磷法可以准确测定卵磷脂的含量。
参考文献
[1]Gregoriadis,G.,etal:LiposomeTechnologyVol.IChapter18,252-254
[2]宋12全文查看 管理资料下
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