001纯化水注射用水微生物限度检查方法学的验证方案.doc

STP-ZK-YZ-FA-001－01 纯化水、注射用水微生物限度检验法 方法验证方案 焦作市民康药业有限公司 验证小组成员、培训情况列表 组长 部门 姓名 岗位 中心化验室 小组成员 部门 姓名 岗位 中心化验室 中心化验室 中心化验室 方案培训人 部门 岗位 培训人 培训日期 中心化验室 验证方案培训情况列表 部门 岗位 受培训人 日期 中心化验室 中心化验室 中心化验室 培训效果评价 目 录 1. 目的 2 2. 范围 3 3. 参考文件 3 4. 人员职责 3 5. 文件确认 3 6. 验证仪器校准的确认 4 7. 验证内容 4 8. 结论 6 9. 再验证周期 6 10. 确认报告批准 7 目的 确认所采用的方法适用合本厂纯化水、注射用水的细菌、霉菌、酵母菌数的测定。照此检查法和检验条件进行供试品细菌、霉菌、酵母菌数检查能保证检验结果的准确、可靠。 范围 纯化水、注射用水微生物限度检查法的方法学验证———薄膜过滤法 参考文件 卫生部令第79号《药品生产质量管理规范(2010年修订)》 《中国药典》2010年版二部 人员职责 质量副总：负责验证方案及方案的批准并组织协调验证工作、签发验证证书。 组长 验证方案的起草。 负责验证的协调工作，以保证本验证工作能按方案规定的程序进行。 负责再验证周期的确认。 检验人员：负责验证工作的具体实施。负责各验证资料（检查结果）的收集整理。 质保部 负责验证方案和报告的审核。 负责验证文件的管理。 文件确认 序号 文件名称 编号 版本 批准状态 1 MJX-150型霉菌培养箱操作维保规程 SOP-ZK-105-01 第一版 2 DHP-9082型电热恒温培养箱操作维保规程 SOP-ZK-106-01 第一版 3 YXQ-LS-30SII型立式压力蒸汽灭菌器操作维保规程 SOP-ZK-119-01 第一版 4 微生物限度检查法标准操作规程 SOP-ZK-049-01 第一版 5 A2型生物安全柜操作维保规程 SOP-ZK-150-01 第一版 确认人 日期 复核人 日期 验证仪器校准的确认 仪器名称 型号 生产厂家 校准状态 电热恒温培养箱 DH-600A 北京科伟 霉菌培养箱 MJX-150 上海申贤恒温设备厂 立式压力蒸汽灭菌器 YXQ-LS-30SⅡ 上海博讯医疗设备厂 生物安全柜 A2 河南天池 确认人 日期 复核人 日期 验证内容 被验证产品 品名：纯化水、注射用水 取样点：总出水口 检验量：10ml 验证方法：《中国药典》2010年版二部微生物限度检查——薄膜过滤法。 合格标准：3次独立的平行试验中，各试验组的菌回收率和稀释剂对照组的菌回收率均不得低于70%。 细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证 细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。 验证用稀释剂： 0.9%无菌氯化钠溶液、pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液 验证用培养基 名称 生产厂家 厂家批号 配制批号 营养琼脂培养基 营养肉汤培养基 玫瑰红钠琼脂培养基 改良马丁培养基 改良马丁琼脂培养基 验证用菌株 菌种名称 菌种编号 传代 金黄色葡萄球菌〔CMCC(B)26003〕 枯草芽孢杆菌〔CMCC(B)63501〕 白色念珠菌〔CMCC(F)98002〕 黑曲霉〔CMCC(F)98003〕 大肠埃希菌〔CMCC(B)44 102〕 验证用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 试验用菌液的制备 取经30～℃培养18~24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、与枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-6~10-7，即约为50~100cfu∕ml的菌悬液备用。 取经23～℃培养24~48小时的白色念珠菌改良马丁液体培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-5，即约为50~100cfu∕ml的菌悬液备用。 取经23～℃培养一周的黑曲霉菌斜面培养物，加入5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液将孢子洗脱，然后吸出孢子悬液，用垫有脱脂棉的漏斗（湿热灭菌）过滤，除去菌丝，收集孢子悬液至另一无菌试管内作为菌原液，