临床样品基因组DNA提取试剂盒.docx

◆◆◆◆微量/临床样品基因组 DNA快速提取试剂盒目录号 1425使用手册实验室使用，仅用于体外微量临床样品基因组 DNA快速提取试剂盒目录号： 1425目录编号142501包装单位50次??适用范围：适合于从微量血液、法医材料、干血点、药签等微量样品中分离纯化基因组DNA。试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成裂解液 ML结合液 CB抑制物去除液 IR漂洗液 WBCarrier RNA洗脱缓冲液 EB蛋白酶 K 粉（可选）20mg/ml吸附柱 AC 和收集管保存室温室温室温室温-20℃室温-20℃室温50次11 ml15 ml25 ml10ml第一次使用前按说明加指定量乙醇310μg10 ml20 mg50套本试剂盒在室温储存 12个月不影响使用效果-1-储存事项：1.2.3.4.?结合液 CB或者抑制物去除液 IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在 37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。为避免降低活性，方便运输，提供蛋白酶 K为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入 1毫升灭菌水溶解。因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分装冻存，－20℃保存。Carrier RNA收到时为冻干粉状，使用前按照注意事项 4配制和储存。避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。仔细阅读注意事项 4。产品介绍：本试剂盒采用特制的进口 DNA吸附柱和独特的缓冲液系统，特别适合于从微量血液、法医材料、干血点、药签、口香糖、尿液等微量样品中分离纯化基因组 DNA。各种来源样品裂解消化处理后 DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜（特别配备了 Carrier RNA可以从体系中轻松捕获微量核酸），再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的基因组 DNA从硅基质膜上洗脱。纯化后的 DNA无杂质和 PCR抑制剂，可直接适用于 PCR分析。?1.2.3.4.产品特点：不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。节省时间，简捷，单个样品操作一般可在 20分钟内完成。配备了 Carrier RNA用于充分收集特别微量 DNA。多次柱漂洗确保高纯度，提取的 DNA纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种常规操作，包括 PCR、酶切、测序、Southern杂交等。-2-?1.2.3.4.1)2)3)4)注意事项：所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C或者类似离心机。开始实验前将需要的水浴先预热到所需温度备用。部分样品需要准备 1M DTT。结合液 CB和抑制物去除液 IR中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。Carrier RNA：Carrier RNA收到时为冻干状，使用时加入 310μl RNase free水充分溶解，配制成1μg/μl溶液。Carrier RNA溶液应避免反复冻融，冻融次数不能超过 3次。所以建议在第一次使用时按自己每次的用量分装在 RNase-free的离心管中后置于－20℃储存。Carrier RNA使用方法：如果起始处理量很少（例如小于 10μl全血和法医样品），我们推荐使用 Carrier RNA，如果预期有较大量 DNA产量，用户可以根据需要选择是否加入 Carrier RNA。使用时在每个样品提取所需结合液 CB中加入 1μlCarrier RNA储存溶液，将结合液 CB与 Carrier RNA溶液充分颠倒混匀即可(结合液 CB容易起泡沫,请勿使用涡旋振荡混匀)。也可根据样品数量，在总共需要的结合液 CB中加入总共需要的 Carrier RNA混匀备用。混合液在室温 24小时内稳定。Carrier RNA加入过多造成 DNA洗脱液中 Carrier RNA浓度过高，下游 PCR反应可能受干扰，加入过少可能并不能帮助提高 DNA产量和 PCR敏感度，因此加入量应该在具体试验中调整以得到最佳效果。由于 Carrier RNA本身是小核酸，所以得到的基因组测定 OD260值会比真实值偏大，建议将得到的基因组直接用 PCR进行检测。-3-?操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）提示：第一次使用前请先在 15ml漂洗液 WB中加入 60ml无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!1.血液样品a.b.c.取 1-100μl血液到 1.5ml的离心管中。如果不足 100μl，加入裂解液 M L补足到 100μl。加入 10μl的蛋白酶 K (20mg/ml)溶液，充分混匀，再加入 100 μl结合液 C