生物学基础实验技能讲义.doc

生物学基础实验技能 实验讲义 王玉倩 冯晓英 郭娟 张潮 汤晓辛 唐婧 编 贵州师范大学生命科学学院 2012年6月 目 录 一、显微操作 1 实验一 显微镜的使用方法与绘图 1 实验二 简单临时装片的制作与观察，油镜的使用 5 实验三 压片的制作，涂片的制作 7 实验四 生物材料的解剖结构观察 9 二、溶液配制 10 实验五 玻璃器皿的洗涤 10 实验六、溶液的配制Ⅰ 12 实验七、溶液的配制Ⅱ 14 实验八 溶液pH值的调节 17 三、分光光度计的使用 19 实验九 分光光度法的介绍及分光光度计的使用方法 19 实验十 混合物中CuSO4的测定 23 实验十一 分光光度法测定叶绿素的含量 25 四、无菌操作 27 实验十二 无菌操作技术 27 一、显微操作 实验一 显微镜的使用方法与绘图实验目的 1、掌握显微镜的构造及原理，熟练使用光学显微镜。 2、了解显微镜使用的基本要求、注意事项及一般维护方法。 3、学习生物绘图的基本要求及方法。实验原理 显微镜的构造 机械部分　　(1) 镜座显微镜最下面呈马蹄形或园形的部分，起稳定和支持镜身作用。　　(2) 镜柱从镜座向上直立的短柱。上连镜臂，下连镜座，可以支持镜臂和载物台。　　(3) 镜臂弯曲成马蹄形的部分，便于手持，下端与镜柱相连接的地方有一个倾斜关节，可使镜臂倾斜，便于观察。　　(4) 载物台自镜臂下端向前伸出，放置标本用的平台，其中央有一个园孔，叫通光孔。台上有一移动器（老式的左右各有一个压片夹），用以固定和移动标本。　　(5) 镜筒和镜臂上方连接的园筒部分。有的显微镜镜筒内有一抽管，可适当抽长，一般长度是－毫米。镜筒上端装有目镜，下端有一个可转动的园盘，叫物镜转换器（或叫物镜旋转盘，固着在镜筒下端，分两层，上层固着不动，下层可自由转动。转换器上有2～4个圆孔，用来安装不同倍数的低倍或高倍物镜）。作用是保护成像的光路与亮度。　　(6) 调节器（也叫调节螺旋）为镜壁上两种可转动的螺旋，一大一小，能使镜筒上下移动，调节焦距。大的叫粗准焦螺旋，位于镜臂的上方，可以转动，以使镜筒能上下移动，从而调节焦距，升降镜筒较快，用于低倍镜对焦；小的叫细准焦螺旋，位于镜臂的下方，它的移动范围较粗准焦螺旋小，升降镜筒较慢，可以细调焦距。　　(7) 倾斜关节镜柱和镜臂交界处有一个能活动的关节。它可以使显微镜在一定的范围内后倾（一般倾斜不得超过45°）便于观察。但是在使用临时封片观察时，禁止使用倾斜关节，尤其是装片内含酸性试剂时严禁使用，以免污损镜体。(8) 载物台从镜臂向前方伸出的金属平台。呈方形或圆形，是放置玻片标本的地方。其中央具有通光孔，在通光孔的左右有一个弹性的金属压片夹，用来压住载玻片。较高级的显微镜，在载物台上常具有推进器，它包括夹片夹和推进螺旋，除夹住切片外，还可使切片在载物台上移动。　光学部分(1) 目镜装于镜筒上方，由两组透镜构成，目镜的作用是把物镜所形成的倒立实像再放大成为一个虚像。目镜上刻有５×，８×，１０×，１５×，２５×等符号，表示放大倍数。我们所观察到的标本的物像，其放大倍数是物镜和目镜放大倍数的乘积。如物镜是１０×，目镜是８×，其物像的放大倍数是１０×８＝８０倍。在目镜内两个透镜间的光栏上可装一根剪短的毛发，做为指针，用以指示要观察的材料。　　(2) 物镜装在镜筒下端物镜转换器的孔中，一般的显微镜有２～４个物镜镜头，每个镜头都是由一系列的复式透镜组成的，其上也有放大倍数记号，有４×，１０×，４０×及１００×。４×及１０×物镜是低倍镜，４０×是高倍镜，１００×是油镜。低倍镜常用于有哪些信誉好的足球投注网站观察对象及观察标本全貌，高倍镜则用于观察标本某部分或较细微的结构，油镜则常用于观察微生物或动植物更细微的结构。　　(3) 聚光器（集光器）位于载物台（通光孔）下方，由两块或数块镜组成，它能将反光镜反射来的光线集中以射入物镜和目镜，有的聚光器可升降，便于调光，集光器下有一可伸缩的园形光圈，叫虹彩光圈，可调集光器口径的大小和照射面，以调节光线强弱（有的显微镜只有遮光极而无集光器）。光线过强时，可缩小虹彩光圈。　　(4) 反光镜是显微镜观察时获得光源的装置，位于显微镜镜座中央，一面为平面镜，一面为凹面镜。转动反光镜，可使外面光线通过集光器照射到标本上。使用时，光线强用平面镜，光线弱用凹面镜。 显微镜使用生物绘图的基本要求及方法具有高度的科学性。形态结构要准确，比例要正确，要求真实，立体，美观。 位置略偏左，右边留着注图。图面要力求整洁，铅笔要保持尖锐，尽量少用橡皮大小要 (4)正式绘图用2H至3H的绘图硬铅笔，描出与物体吻合的线条。线条要一笔勾出