血清葡萄糖的测定(GOD-POD法).ppt

血清葡萄糖的测定（GOD-POD法） 血清测定是临床生物化学检验中的常规检测项目之一。 实验分为以下部分 实验目的 实验原理 实验试剂 实验操作 数据分析 注意事项 临床意义 * * 实验目的 掌握酶法血清葡萄糖浓度的原理 掌握血糖变化的临床意义 * * 实验原理 血清葡萄糖是用以过氧化物酶的偶联酶反应定量法测定的。 葡萄糖氧化酶（GOD）利用氧将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，同时释放过氧化氢。过氧化物酶（POD）催化过氧化氢氧化色素原（如4-氨基安替比林和苯酚），并使色素原氧化成色素，即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖的含量成正比。 葡萄糖 GOD 红色醌类化合物 POD * * 实验试剂 器材 5ml移液管，50或100ul微量可调式移液管,721E型分光光度计，1比色皿，37度恒温水 浴锅。 试剂 0.1磷酸盐缓冲液（Ph=7.0） 称取无水磷酸二氢钾5.3g，溶于蒸馏水800ml中，调节pH=7.0,定容至1L 酶试剂 取过氧化物酶1200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮化钠100mg，溶入磷酸盐缓冲液80ml中，调节pH值至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，置于4度保存，可稳定存在3个月。 酚溶液 称取重蒸馏酚100mg，溶入蒸馏水100ml中，用棕色瓶储存。 酶-酚混合试剂 将酶试剂及酚溶液等量混合，4度可放一个月。 * * 实验试剂 12mmol苯甲酸钠溶液 称取苯甲酸钠1.6g，于800ml蒸馏水中加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至1L。 葡萄糖标准储存液（100mmol/L） 称取已干燥至恒重的无水葡萄糖1.082g，溶入约70ml 12mmol/L苯甲酸钠溶液中定容至100ml。2h以后方可使用。 葡萄糖标准工作液（5mmol/L） 吸取葡萄糖标准储存液5.00ml，置入100ml容量瓶中，用12mmol/L，苯甲酸钠溶液稀释至刻度，混匀。 * * 实验操作 试剂 空白管 标准管 测定管 血清/μL - - 0.02 葡萄糖标准液/μL - 0.02 - 蒸馏水/μL 0.02 - - 酶酚混合试剂/μL 3.00 3.00 3.00 混匀，置于37°C水浴中，保温25min，在波长510nm处比色，以空白管调零，读取标准管和测定管的吸光度。 血清葡萄糖的含量= ⅹ5mmol/dL 参考值：3.89-6.11mmol/L * * 注意事项 葡萄糖氧化酶法可直接用于测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰性物质浓度过高，可干扰氧化酶反应，造成结果假性偏低。 因红细胞的酵解将导致测定结果偏低，建议测定样品以草酸钾-氟化钠为抗凝剂以抑制糖酵解。 严重黄疸，溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后在进行测定。 * * 临床意义 生理性高血糖：可见于摄入高糖食物后，或紧张情绪肾上腺素分泌增加时。 病理学高血糖：1.糖尿病:病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。2.内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进，引起各种对抗胰岛素的激素分泌过多，或升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。3.颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤，颅内出血，脑膜炎等，引起血糖增高。4.脱水引起的高血糖：如呕吐，腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。 生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动时 病理性低血糖：特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性，肝源性和胰岛素瘤等。 * *