7.3三萜皂苷.ppt

提取 游离三萜——氯仿、乙醚、石油醚 三萜酸——碱溶酸沉法 三萜皂苷——甲醇、乙醇或稀乙醇，然后用正丁醇萃取或用丙酮、乙醚沉淀。 一、苷元的提取与分离 （一） 提取 1.醇提，提取物直接进行分离； 2.醇提，有机溶剂萃取； 3.制备成衍生物再进行分离； 4.将皂苷进行水解，有机溶剂提； （二）分离 硅胶柱层析 石见穿（小丹参、石打穿、紫参） 为植物唇形科石见穿Saluia chinensis Benth.的全草。产于江苏、湖南、湖北、广西、广东、四川等地。 含甾醇、三萜类、氨基酸及水苏糖。 药用 （1）败毒抗癌，用于癌瘤积毒；（2）消炎退肿，用于炎症肿痛。 （二）分离 1.分配柱层析法 以硅胶为支持剂，CHCl3-MeOH-H2O，CH2Cl2-MeOH-H2O，EtOAc-EtOH-H2O或水饱和的正丁醇等溶剂系统洗脱。 2.反相层析法 以反相键合相RP-18、RP-8为填充剂，常用CH3OH-H2O或乙腈-水为洗脱剂。 3、大孔吸附树脂 水洗去糖等水溶性杂质， 10-30%甲醇或乙醇洗下极性大的皂苷，50%以上甲醇或乙醇洗下极性小的皂苷。 4、Sephadex LH-20凝胶色谱 分子筛原理，分子量大的先洗下来，分子量小的后洗下来。 5、沉淀法 (1)分段沉淀法：逐渐加入乙醚、丙酮。 中性醋酸铅:酸性皂苷沉淀 (2)铅盐沉淀法 碱性醋酸铅:中性皂苷沉淀 (3)胆甾醇沉淀法： 皂苷-胆甾醇复合物加乙醚回流提取，胆甾醇溶于乙醚，剩下的残留物为皂苷。 (2)三氯醋酸 甾体皂苷加热到60℃显色 泡沫试验：持久、加热不消失。 加热消失或减少——蛋白质 (3) 香草醛-硫酸 显色可做定量 2、色谱检识 硅胶层析： 氯仿-甲醇 –水系统分离皂苷 甾体皂苷:中性溶剂系统 苷元 :环己烷-乙酸乙酯 三萜皂苷:可用酸性溶剂系统 显色剂：10%硫酸、25%三氯醋酸、5%香草醛-硫酸 2、水解反应 多用温和的水解条件，如酶水解，微生物水解，紫外线照射水解，封管水解，Riliani’s混合液（乙酸：盐酸：水=35：15：50）水解和Smith降解方法，可以获得原始的苷元。 但是某些三萜酸酯类成分，如齐墩果酸甲酯，白桦酯酸甲酯等，特别是C17位α键上的-COOCH3基团，由于空间位阻较大，在氢氧化钾的乙醇溶液中，虽经长时间加热，仍不能水解。若改用氢氧化钾的二甘醇溶液于200℃水解，则可得到相应的三萜酸，这一特点有助于判断羧基的位置。 3、氧化反应 三萜化合物分子上的羟基可被氧化成醛或酮，常采用铬酸-吡啶氧化，欧芬脑尔（oppenauer）氧化、Jone’s氧化等方法进行，以铬酸-吡啶氧化法应用最多。 欧芬脑尔氧化的特点：条件温和，后处理也简单，而且可以选择性的氧化仲羟基，不影响伯羟基和双键。 4、还原反应 萜类化合物上的醛、酮基可经Wolff-Kiskner-黄鸣龙反应或催化还原成甲基、次甲基；也可将羟基先对甲苯磺酰化，再经四氢铝锂还原成相应的甲基或亚甲基。 5、脱羧、脱羟基反应 具有β、γ-不饱和酸结构的三萜，在加热情况下可脱去羧基，常利用此反应确定羧基的位置。 6、重排反应 已发现的三萜化合物中，齐墩果烷型化合物占多数，可能是因为齐墩果烷型的骨架最稳定。 一些非齐墩果烷型骨架的三萜化合物如羽扇豆烷型、乌苏烷型等可向齐墩果烷型转化。 由羽扇豆烷型向齐墩果烷型转化的重排，可用于确定羽扇豆烷型三萜C28位的羧基。 二、三萜的波谱特征 1、紫外光谱(UV) 有一个孤立双键:205-250nm 处有微弱吸收; α、β不饱和羰基λmax:242-250nm； 异环共轭双烯λmax:240、250、260nm； 同环共轭双烯λmax:285nm。 多数三萜类化合物不产生紫外吸收，但以浓硫酸为试剂测定五环三萜类化合物时，可在310nm处观察到最大吸收，且不受母核上的取代基影响。 2、红外光谱(IR) 根据红外光谱A区（1355-1392cm-1）和B区(1245- 1330 cm -1 ）的碳氢吸收来区别齐墩果烷、乌苏烷和四环三萜的基本骨架。 齐墩果烷型的A区有两个峰（1392-1379cm-1，1370-1355cm -1）；B区有三个峰（1330-1315cm-1，1306-1299cm-1，1269-1250cm-1）。 乌苏烷型的A区有三个峰（1392-1386