15 第十五章 甾体激素类药物的分析.ppt

药物分析 甾体激素类药物的分析 甾体激素类药物的分析 Contents 思考题 9、用合适的化学方法区分下列药物：氢化可的松（A）、甲睾酮（B）、黄体酮（C）和雌二醇（D）。 加入铁－酚试剂 [(NH4)2Fe(SO4)2 + H2SO4 + H2O2 + 苯酚] * 铁盐的作用 加快黄色产物的形成、转化 加强红色产物的稳定性 * 酚的作用 加快红色产物的形成 消除反应产生的荧光 Iron-phenol Reagent 第五节 生物样本中甾体激素的分析 GC-MS:尿样→SPE萃取→衍生化→GC/MS分析 HPLC-MS:血清→ →HPLC/MS分析 练习与思考 [A型题] 1. 黄体酮的专属反应是 A.与硫酸的反应 B. 斐林反应 C. 与亚硝基铁氰化钠的反应 D.异烟肼反应 E. 硝酸银反应 第二节 Identification 2.官能团的反应 ① C17-α-醇酮基——还原性 A. 呈色反应 C17-α-醇酮基 四氮唑盐 OH- 呈色 B. 沉淀反应 C17-α-醇酮基 氨制硝酸银 银镜反应 C17-α-醇酮基 碱性酒石酸铜 Cu2O↓ 第二节 Identification ② C3–酮基和C20–酮基 甾酮类 2,4-二硝基苯肼 呈色 异烟肼、硫酸苯肼 异烟腙（黄色） 睾酮 异烟双腙（黄色） 黄体酮 ③ 甲酮基或活泼亚甲基 第二节 Identification 亚硝基铁氰化钠 间二硝基酚/芳香醛 呈色 蓝紫色 黄体酮 专属鉴别反应 黄体酮 蓝紫色 亚硝基铁 氰化钠 其他甾体 淡橙色或 不显色 第二节 Identification 有机氟 Fˉ 有机破坏 有机氯 Clˉ ④有机卤素 茜素氟蓝 硝酸亚铈 硝酸—硝酸银 AgCl↓ 呈蓝紫色 第二节 Identification ⑥ 乙炔基 第二节 Identification ↓ 炔雌醇 白 ⑦ 酯基 ⑤ 酚羟基 雌激素类 重氮苯磺酸 红色偶氮染料 △４-3-酮、苯环、其他共轭结构 结构依据 240nm左右 280nm左右 三、UV 第二节 Identification 结构特征：酚羟基、C17 –OH C17 –乙炔基 炔雌醇 四、IR 第二节 Identification 1505cm-1 ν 3505cm-1 3300cm-1 ν 1590cm-1 3610cm-1 ν 酚羟基 醇羟基 1615cm-1 苯环的骨架振动 黄体酮 结构特征：△４-3-酮、C17-酮基 四、IR 第二节 Identification 1700cm-1 ?C=O 20位酮基 1665cm-1 3位酮基 1615cm-1 870cm-1 ?C-H 双键 五、TLC法 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别 方法：对照品法 要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。 第二节 Identification 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏） 方法：对照品法 要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。 六、HPLC法 第二节 Identification 一、有关物质的检查 检查意义：其他甾体与甾体激素药物结 构相似，也有一定的药理作 用而又互不相同. 检查方法（具有一定分离能力） TLC法（高低浓度对比法） HPLC法（类似高低浓度对比法） 第三节 Purity Test 第三节 Purity Test 氢化可的松中其他甾体检查 对照品 60μg/ml 供试品 3.0mg/ml CHCl3-MeOH(9:1) 溶剂 硅胶GF254 二氯甲烷-乙醚-甲醇-水 385 :60 : 15 : 2 展开后晾干 105℃干燥10min 碱性四氮唑蓝显色 （一）TLC 判定方法： 规定杂质斑点数目 规定杂质斑点颜色 对照溶液——0.02mg/ml 供试液——1 mg/ml （二）HPLC 第三节 Purity Test 黄体酮中有关物质检查 供试品溶液的杂质峰数不得超过1个，其面积不得大于对照液的主峰面积的3/4 第三节 Purity Test 二、硒的检查 来源 合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢 三、溶剂残留 甲醇和丙酮(GC) 0.3% 0.5% 第三节 Purity Test 四、游离磷酸盐检查 钼酸铵 磷钼酸 740nm，UV-Vis 第四节 Assay HPLC UV 比色法 非水溶液滴定法 四氮唑比色法 异烟肼比色法 柯