细胞凋亡－Hoechst染色试剂盒.doc

细胞凋亡－Hoechst染色试剂盒使用说明：1．贴壁细胞??A.取洁净盖玻片在70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用无菌的PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。??B.刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5ml 固定液，固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。??C.去固定液，用PBS或0.9%NaCl 洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动。??D.加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。也宜用摇床，或手动晃动数次。??E.去染色液，用PBS或0.9%NaCl 洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动。??F.滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片液，尽量避免气泡。??G.荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长350nm左右，发射波长460nm左右，图谱请参考下图。2.悬浮细胞??A.离心收集细胞样品于1.5ml离心管内，加入0.5ml 固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。??B.离心去固定液，用PBS或0.9%NaCl 洗两遍，每次3分钟。洗涤期间手动晃动数次。??C.离心后吸去大部分液体保留约50μl液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。??D.稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。??E.均匀滴上0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。用吸水纸从边缘吸去液体，微晾干。??F.去染色液，用PBS或0.9%NaCl 洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动。??G.滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。??H.荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长350nm左右，发射波长460nm左右，图谱请参考下图。3.组织切片??A.常规包埋切片后，根据切片的不同类型，处理至可以用于免疫组化染色。??B.PBS或0.9%NaCl 洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动。可在六孔板中操作。??C.加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。也宜用摇床，或手动晃动数次。??D.去染色液，用PBS或0.9%NaCl 洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动。??E.小心将切片置于载玻片上，滴一滴抗淬灭封片液，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。??F.荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长350nm左右，发射波长460nm左右，图谱请参考下图。?????????????????????????Hoechst 33258的吸收光谱和发射光谱，左侧峰为吸收光谱，右侧峰为发射光谱。细胞凋亡－Hoechst染色试剂盒(Hoechst Staining Kit)为您提供了一种经典而又快速简便的细胞凋亡检测方法。细胞发生凋亡时，染色质会固缩。所以Hoechst 33258染色后，在荧光显微镜下观察，正常细胞的细胞核呈正常的蓝色，而凋亡细胞的细胞核会呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染，颜色有些发白。典型的Hoechst 33258染色后的细胞图片参考下图。刺激后有致密浓染的凋亡细胞??????正常细胞核???????????????????只需25分钟即可完成细胞凋亡检测的整个过程。????本试剂盒提供了固定液，染色液，及抗荧光淬灭封片液。????本试剂盒对贴壁细胞，悬浮细胞和组织切片均适用。????足够检测100个样品。包装清单： 产品编号 产品名称 包装 C0003-1 固定液 50ml C0003-2 Hoechst 33258染色液 50ml C0003-3 抗荧光淬灭封片液 5ml — 说明书 1份 保存条件：????4℃保存，Hoechst 33258染色液需4℃避光保存。本试剂盒自订购之日起六个月内有效。注意事项：????需可以观察蓝色荧光的荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。????需PBS或0.9%NaCl溶液。????需自备盖玻片与载玻片。盖玻片与载玻片可以向碧云天订购。????荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。可以向碧云天选购各种型号的载玻片存储盒。????在使用抗淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光。????为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。?