5-ALA-PDT对鼻咽癌细胞C666-1和CNE2的杀伤效应研究毕业答辩__培训课件.ppt

2013届硕士研究生学位论文答辩 5-ALA-PDT对鼻咽癌细胞C666-1和CNE2的杀伤效应研究 2013年6月7日 论文结构 第一章 C666-1和CNE2细胞的EBV检测 第二章 5-ALA在NPC细胞中的药代动力学研究 第三章 鼻咽癌细胞对5-ALA-PDT的响应比较 第四章 全文总结与研究工作展望 绪 论 第一章 C666-1和CNE2细胞的EBV检测 研究背景及选题意义 论文工作重点介绍 论文工作总结 工作展望 致谢 汇报大纲 三 四 一 研究背景和选题意义 二 论文研究内容介绍 实验结果及分析 全文总结及研究工作展望 五 个人科研成果与致谢 一 研究背景和选题意义 光动力治疗鼻咽癌研究背景 鼻咽癌（NPC）发病机理 EBV DNA (＞95%) NON-EBV DNA (＜5％) 细胞株 C666-1 细胞株 HK1,CNE2 光敏剂选择性潴留于病变组织 特定波长的光源实施靶向治疗 1 PDT具有双重选择性 EBV- C666-1 2007年，杨小民等人研究5-ALA和HpD介导的PDT对EBV+C666-1和EBV-CNE2 的响应情况 2009年，陈争等人研究HMME-PDT对EBV+ C666-1和EBV-CNE2细胞杀伤效应的实验 研究现状 PDT对CNE2的杀伤作用大于C666-1 研究结果： CNE2对HMME的吸收能力高于C666-1 不足之处： 未对5-ALA和HpD在细胞中的潴留情况和亚细胞分布进行分析 1 研究结果： PDT对CNE2的杀伤作用大于C666-1 原 因： 不足之处： EBV对NPC-PDT疗效是否产生影响尚不明确 研究现状 1 HMME（外源性）: 通过渗透作用进入细胞 5-ALA（内源性）： 本身不是光敏剂，进入细胞后，通过细胞的新陈代谢作用产生具有光敏性的物质PpIX 细胞的生长状态以及新陈代谢情况会影响5-ALA合成PpIX，不同生长周期的同种细胞合成PpIX的能力不同。 生长曲线 几乎所有5-ALA-PDT实验都是在对细胞培养24h后开展，不能很好的反映5-ALA-PDT对细胞的杀伤效果。 不足之处： 选题意义(创新点) 首次选用EBV+C666-1、EBV-C666-1和 CNE2 为研究对象，有望为探讨EBV在NPC-PDT的作 用机制提供理论依据。 　　 1 首次研究相同浓度5-ALA在不同生长期细胞内的药代动力学规律 二 论文研究内容介绍 2 2 5-ALA在NPC细胞中的药代动力学研究 5-ALA-PpIX在NPC细胞内的亚细胞分布的检测 5-ALA-PpIX在不同生长期细胞内荧光量的检测 2 5-ALA在NPC细胞中的药代动力学研究 5-ALA-PpIX在不同生长期细胞内荧光量的检测 24、48、72、96和120 h 5-ALA在NPC细胞中的药代动力学研究 5-ALA-PpIX在NPC细胞内的亚细胞分布的检测 2 共焦显微镜原理图 NPC细胞对5-ALA-PDT的响应评估 PDT实验 2 三株细胞以2×105/孔的密度接种在六孔板中培养，24、48和72小时后进行PDT实验 细胞接种：（对照组和实验组） 照光光源： 光功率密度：15mW 光 波 长：627nm 照光剂量： 09 、1.8、2.7和3.6 J/cm2 NPC细胞对5-ALA-PDT的响应评估 细胞存活率检测 用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其吸光度值 Cell Counting Kit-8（CCK-8）试剂盒 活细胞 ＋ WST-8 WST-8 formazan 2 三 实验结果及分析 5-ALA-PpIX在不同生长期细胞内荧光量 2 3 2 5-ALA-PpIX在NPC细胞内的亚细胞分布 3 小结 1 2 3 生长速度： EBV-C666-1 CNE2 EBV+C666-1 细胞吸收5-ALA-PpIX的能力： 5-ALA-PpIX的亚细胞分布： C666-1 : CNE2 : 线粒体 细胞膜 EBV+C666-1 EBV-C666-1 CNE2 EBV-C666-1 3 NPC细胞对5-ALA-PDT的响应评估 EBV+ C666-1在48 h，72 h的5-ALA-PpIX单细胞荧光量与24 h的荧光量基本相同，且对PDT的响应程度无显著差异。因此，本实验只给出EBV+ C666-1在细胞培养24 h后的PDT存活率。 5-ALA-PDT对EBV+C666-1细胞的杀伤作用最显著。 3 EBV-C666-1和CNE2细胞存活率比较 2 3 EBV-C666-1和CNE2细胞存活率比较 24 h ：CNE2 EBV-C666-1 48 h ：CNE2 EBV-C666-1 72 h ：CNE2 EBV-C666-1