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接种方法： 异步接毒：细胞长成单层后，接入病毒液，37度吸附1h后加入维持液，多数病毒采用该接毒方式。 同步接毒：在培养细胞的同时或在培养细胞后4h后接入病毒 细胞增殖指标与收获 细胞病变（CPE）作为判断病毒能力的指标，即计算病毒的TCID50。 CPE显微镜下主要表现： 细胞圆缩 细胞融合形成合胞体 轻微病变 HeLa细胞1.细胞种类：人HeLa细胞传代培养；2.培养的天数：7d；3.放大倍速：倒置显微镜 X200；4.培养基种类：DMEM+10%小牛血清；5.细胞状态与特征简述：细胞呈多角形，贴壁生长。 K562细胞 1.细胞种类：K562（人慢性红白血病细胞株）；2.培养的天数：传代后2天；3.放大倍数：倒置显微镜 X10；4.培养基种类：RPMI1640+10%胎牛血清，4mM Glutamine；5.细胞状态与特征简介：悬浮生长，少数贴壁，喜爱成团悬浮。  每代贴壁细胞的生长过程 游离期 贴壁期 潜伏期 对数生长期 停止期（平台期） 游离期 悬浮，胞质回缩，全部细胞变为圆球形。 吸附期 贴附底物，一般24小时内贴壁。 潜伏期 此时细胞有生长活动，基本无增殖。 细胞株潜伏期一般为6～24小时。 对数生长期 细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进 行实验研究。 停止期（平台期） 细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂 机制：接触抑制、密度依赖性 根据细胞生长的恃点，传代方法有3种： 1．悬浮生长细胞传代 离心法传代：离心（1000转/分）去上清，沉淀物加新 培养液后再混匀传代。 2．半悬浮生长细胞传代（Hela细胞） 此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用 直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来，进行传代。 3．贴壁生长细胞传代 采用酶消化法传代。 常用的消化液有0.25％的胰蛋白酶液。 细胞传代方法 首次传代注意事项 细胞生长密度不高时，不能急于传代 原代培养的贴壁细胞需控制消化时间 吹打已消化的细胞应减少机械损伤 首次传代时细胞接种数量要多一些 首次传代培养的pH应偏低些 小牛血清浓度可加大至15%～20%左右 细胞计数 计数结果以每毫升细胞数表示 细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同 血细胞计数器：手工计数细胞 Coulter计数仪：人工计数 细胞计数步骤 1、将血球计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板上。 2、将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。　 3、静置3分钟。 4、镜下观察，计算计数板四大格细胞总数。 　　细胞数/ml＝4大格细胞总数/ 4×104 注意：压线细胞只计左侧和上方的。 镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。 培养细胞活力测定 细胞活力： 总细胞中活细胞所占的百分比 由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用。 复苏后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏的效果。 测定方法 台盼蓝法 活细胞不被染色，死细胞染成蓝色。 流式细胞仪 细胞活性指标通常包括细胞膜对核酸染料的通透性，代谢活性，膜电位等。 3．四唑盐（MTT）比色法 四唑盐（MTT）商品名为噻唑蓝； MTT比色法的原理： 活细胞中琥珀脱氢酶能将四唑盐还原成不溶干水的蓝紫色产物甲臢 （formazan)，并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。 二甲亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与所含的formazan量成正比。 甲臢染料在A570nm处产生吸收值，用酶标仪测定OD值； 细胞冻存和复苏 细胞深低温保存的基本原理是： 在－70℃以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。 细胞低温保存的关键： 在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内，水晶呈针状，极易招致细胞的严重损伤。 冻存和复苏的原则：慢冻快融 慢冻程序 4 ℃ 10 分钟 －20 ℃ 30 分钟 －80 ℃ 16 - 18 小时(或隔夜) 液氮罐长期储存。 细胞复苏方法 （1）从液氮中取出冷冻管，迅速投入37～ 38℃水浴中，使其融化（1分钟左右）