高活性光合细菌荚膜红假单胞菌培养特性初探.doc

高活性光合细菌荚膜红假单胞菌培养特性初探 摘要: 从洛河水中进行了光合细菌的分离, 得到一株细胞活性高的荚膜红假单胞菌 JM12, 并对其培养条件进行了初步摸索。结果表明: 该菌适宜在 pH 值 6～7, 盐浓度 0%～3% , 温度 25℃～35℃以及有光照条件下生长。 关键词: 光合细菌; 荚膜红假单胞菌; 培养特性 当前我国水产业迅猛发展, 但由于长期养殖方式 不当, 导致池塘老化, 水质恶化, 有机物严重污染, 致病 微生物大量繁殖, 形成大量的鱼虾病害。由于目前大量 使用化学药品和抗生素来防治鱼虾病害的发生, 化学 药品易残留在环境中, 带来环境的二次污染, 抗生素容 易使病毒产生抗药性, 长期使用后效果不佳。与其相 比, 光合细菌具有较多的优点, 在水产养殖中具有较大 的开发应用价值。光合细菌是广泛存在于自然界的微 生物, 是一类以光为能源, 利用自然界中的有机物、硫 化物等为营养体, 并能进行光合作用的生物。光合细菌 在水产养殖中具有良好的水质调节作用, 而且富含 B 族维生素和辅酶 Q 等生理活性物质, 可促进鱼虾等水 生生物的生长, 也能防治鱼虾病害的发生。光合细菌的 多种良好性能已引起国内外广大学者的关注。我们特 从洛河水中进行了光合细菌的分离, 得到一株细胞活 性高的荚膜红假单胞菌 JM12, 并对其培养条件进行了 初步摸索, 为以后的应用研究打下基础。 1 实验材料 1.1 光合细菌 荚膜红假单胞菌( Rps.capsulata) , 为本实验室选育 保存菌种, 能高效降解养殖水体氨氮。选育方法为取洛 河水样 20 mL, 接入装有 200 mL 分离培养基的三角瓶 中, 置于 30℃下静置培养 2 d～3 d, 待培养液呈现混浊 后, 以 10%接种量转接入新的分离培养基中培养, 如 此重复 2 次～3 次。后吸取培养液, 用无菌水适当稀释, 分别涂布在含有 2%盐浓度的固体分离培养基上, 挑 取优势生长菌落, 划线在 0.5%盐浓度的固体培养基 上。最后挑取在 0.5%与 2%盐浓度下均能良好生长的 菌株进行降解氨氮功能的筛选。其步骤为将分离菌株 分别接种于 212 mg/L 氨氮( 硫酸铵 1 g) 的分离培养基 中, 于 30℃下静置培养 2 d 后测定氨氮的降解率, 选取 降解氨氮作用最好的菌株斜面保藏。 1.2 光合细菌基础培养基( g/1 L 蒸馏水) CH 3 COONa 3.0 g, NaCl 1.0 g, (NH4) 2 SO 4 0.3 g, Mg SO4 0.2 g, KH 2 PO 4 0.5 g, K 2 HPO 4 0.3 g , CaCl 2 50 mg, 酵母膏 0.1 g, MnSO 4 2.5mg, FeSO 4 5 mg, 蛋白胨 10 mg, 谷氨酸0.2 mg, pH 值 7.4, 121℃蒸汽灭菌 20 min。 2 实验方法 2.1 光合细菌的生长曲线测定 将活化后的光合细菌—荚膜红假单胞菌以 5%接 种于光合细菌基础培养基中, 置于 30℃、500 LX 光照 强度下静置培养, 每隔 12 h 取样, 用 721 分光光度计 测定细胞生长量( OD 660 nm) 。 2.2 光照对光合细菌生长的影响 接种 5%的荚膜红假单胞菌于光合细菌基础培养 基中, 置于 30℃下、分别在 500 LX 光照强度与无光照 下静置培养, 每隔 12 h 取样, 跟踪测定细胞生长量 ( OD 660 nm) , 探讨光照( 有、无) 对菌体生长的影响。 2.3 温度对光合细菌生长的影响 将已接种的光合细菌培养液于光照强度为 500 lx 的条件下培养, 温度分别控制 在 15℃、20℃、25℃ 28℃、30℃、35℃、40℃、45℃, 72 h 后用 721 分光光度计 测定菌体细胞生长量( OD660 nm) , 探讨温度对菌体生 长的影响。 2.4 pH 值对光合细菌生长的影响 荚膜红假单胞菌接种于光合细菌基础培养基中, 72h 后测定菌体细胞生长量( OD 660 nm) , 探讨不同初 0 0.5 1 2 3 4 5 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 （%） 图 5 盐度对光合细菌的生长影响 始 pH 值( 5～10) 对菌体生长的影响。 2.5 盐浓度对光合细菌生长的影响 荚膜红假单胞菌接种于光合细菌基础培养基中, 72h 后测定菌体细胞生长量( OD 660 nm) , 探讨盐浓度 ( 0%～5%) 对菌体生长的影响。 3 结果 3. 1 光合细菌的生长曲线 结果表明( 图 1) , 在培养过程中, 荚膜红假单胞菌 迅速进入对数生长期, 在 48 h 进入稳定期。 3.2 光照 结果显示( 图 2) , 在培养初期, 荚膜红假单胞菌在 有光照条件下会比