MICM检测在恶性血液病中运用__培训课件.ppt

* * 细胞遗传学中染色体异常包括结构和数量异常，是我们每个白血病初诊病人都必检项目，是否有染色体异位或缺失导致病变。 * * * * * * * * 通过检测多发性骨髓瘤患者的基因异常情况，可以判断患者的生存期。P53缺失、1q21 扩增、 IGH发生t(4;14) t(14;16)易位的患者预后较差，中位生存期24.7个月。 RB1缺失、 D13S319缺失的患者预后中等，中位生存期42.3个月。包括IGH发生t(11；14)易位在内的其他遗传学改变的患者，预后较好，中位生存期50.5个月。通过判断患者的生存期，可以根据不同患者的预后情况使用不同的临床用药方案，实现个体化的治疗。 多发性骨髓的初治治疗多选用化疗，包括MP方案（马法兰、泼尼松）、VAD方案（长春新碱、多柔比星、地塞米松）等；对于难治和复发的多发性骨髓瘤，多采用联合化疗和沙利度胺进行治疗；干扰素主要用于维持治疗，对上述治疗方法无效者可进行造血干细胞移植。对于预后好的患者，使用α干扰素、环磷酰胺或联合化疗没有明显的区别；对于预后中等的患者，使用α干扰素治疗反而会缩短患者总生存期。可见，多发性骨髓瘤基因异常的检测对临床有效开展个性化治疗提供了重要依据。 MDS预后判断 MDS的国际预后积分系统（IPSS） 五、分子生物学检测 分子诊断常用技术 核酸分子杂交技术 荧光原位杂交（FISH） 聚合酶链反应（PCR）技术 实时荧光定量PCR、多重PCR技术 基因测序 Sanger 测序法、二代测序技术 荧光原位杂交 (FISH) 生命科学中的“钓鱼” 技术 原理：通过荧光标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交 目的：获得细胞内多条染色体或多种基因状态的信息 荧光标记探针 探针变性 样本DNA变性 杂交 荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization, FISH） FISH检测BCR/ABL融合基因 BCR/ABL 基因正常 BCR/ABL基因融合 9号 22号 双色单融合探针，检测染色体易位 abl bcr 聚合酶链反应PCR 95℃ 72℃, dNTP, 酶, Mg2+ 55℃ 按照上述步骤重复操作，PCR产物呈指数扩增 模板DNA 扩增倍数T=2n (n: 循环次数) Sanger 测序法 DNA双脱氧链终止法测序 各个平台的特点 血液病分子诊断的意义 CBFB/MYH11 AML1/ETO PML/RARa E2A/PBX1 MLL/AF4 BCR/ABL TEL/AML1 SIL/TAL1 EVI1 HOX11 MLL/AF10 MLL-AF9 MLL/ENL NPM1/ALK NPM/MLF1 MLL/ELL MLL/AFX MLL/AF1q MLL/AF1p PLZF/RARa MLL/AF6 MLL/MLL（dupMLL） TLS/ERG TEL/PDGFR TEL/ABL SET/CAN DEK/CAN MLL/AF17 E2A/HLF NPM/RARa AML1/MDS1 CBFB/MYH11：Inv(16)(p13q22)是急性髓系白血病(AML)特征性染色体异常，通常见于AML-M4Eo亚型，占总AML患者的10%，其中50％发生在AML-M4Eo中。 带有Inv(16)(p13q22)的病人通常有较好的预后。该基因阳性的病人，可用于疗效监测和微小残留的检测。 AML1/ETO：出现在所有的t(8,21)阳性的AML中， 同时也出现在具有复杂移位的t(8,21)阴性的AML病例中。 其主要出现在AML-M2这一亚型中，大约有20-40%病例具有t(8,21)。在非常少见的AML-M1，AML-M4和t-AML中也有报道。 t(8,21)异位是一个较好的标志，它的存在使这类病例对一些药物有较好的反应。因此基于细胞遗传学和分子遗传学的检测结果，可以为病人选择风险低的较好的治疗方案。该基因阳性的病人，可用于疗效监测和微小残留的检测。 PML/RARa：t(15,17)易位是APL的一个典型标志，其易位造成了15号染色体上的PML基因和17号染色体上的RARa基因的融合，产生了一个融合基因PML/RARa。 检测PML/RARa融合基因的存在与否，对APL的诊断，判断ATRA的疗效和预后复发都非常重要。PML/RARa阳性强烈预示着复发的可能，而其持续性阴性则预示病人有更长的生存期。该基因阳性的病人，可用于疗效监测和微小残留的检测。 PLZF/RARa：t(11;17)(q23;q21)易位，特定的在急性早幼粒白血病或急性非淋巴细胞白血病M3型中发现。功能尚不明确。 预后明显差与有t(15;17)易位的ANLL M3型，其对ATRA的化疗无反应。 N