小鼠Ⅰ型胶原α2 (COL1a2)-ELISA试剂盒说明书小鼠Ⅰ型胶原α2 (COL1a2)-ELISA试剂盒说明书.docx

小鼠Ⅰ型胶原α2(COL1a2)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书产品编号：E-EL-M0318（本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!）声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。本产品选用世界著名生产厂家的原料，采用专业ELISA kit生产技术制造。适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组COL1a2浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！如有疑问，请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。试剂盒组成：名称-中文名称-英文规格保存条件ELISA酶标板Micro ELISA Plate 8×12 / 8×6*4℃冻干标准品Reference Standard 2/ 1支*4℃标准品样品稀释液Reference Standard Sample Diluent 1瓶 20mL/12mL*4℃浓缩生物素化抗体Concentrated Biotinylated Detection Ab 1支120μL/70μL*4℃生物素化抗体稀释液Diluent for Biotinylated Detection Ab 1瓶10mL/6mL*4℃浓缩HRP酶结合物Concentrated HRP Conjugate 1支120μL/70μL*4℃(避光)酶结合物稀释液Diluent for HRP Conjugate 1瓶 10mL/6mL* 4℃浓缩洗涤液（25×）Concentrated Wash Buffer （25×）1瓶30mL/16mL*4℃底物溶液（TMB）Substrate Reagent 1瓶 10mL/6mL*4℃(避光)反应终止液Stop Solution 1瓶10mL/6mL*4℃封板覆膜Plate Sealer5/3张*产品说明书Product Description1份*: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整）检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠COL1a2抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的COL1a2会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠COL1a2抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠COL1a2抗体与结合在包被抗体上的小鼠COL1a2结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值，COL1a2浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中COL1a2的浓度。标本收集:血清：全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。血浆：抗凝剂推荐使用EDTA.Na2，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂标本。组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测（具体处理方法可参考：/news2.asp?tid=477）标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃冰箱内，避免反复冻融，1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做预实验，以确定稀释倍数)。试验所需自备物品:酶标仪(450nm波长滤光片)高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水吸水纸检测前准备工作:请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。标准品: 加入标准品样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，静置10分钟，待其充分溶解后，轻轻混匀(浓度为10ng/mL)。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔