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Southern杂交 ，通过用限制性内切酶消化基因组或其它来源的 DNA ，经过琼脂糖凝胶电泳按大小分离酶切所得的片段，随后 DNA 在原位发生变性并从凝胶转移到一固相支持物上（一般是硝酸纤维素膜或尼龙膜）。 DNA 转移至固相支持物的过程中各 DNA 的相对位置保持不变，用一定方法（如放射性同位素）标记的 DNA 探针与固着在膜上的 DNA 杂交，经X-光片自显影显现出与探针 DNA 互补的 DNA 电泳条带的位置。 实验一 植物总 DNA 的快速少量抽提（CTAB法） - 返回 - DNA 分子是分子生物学研究的基本材料，依不同的实验目的可采取不同的抽提方法获取数量和质量不等的 DNA 。 实验目的：了解植物 DNA 抽提的主要方法，掌握 CTAB 法快速抽提水稻 DNA 。 实验材料及试剂： 水稻叶片， 1.5 × CTAB ，氯仿 / 异戊醇 (24:1) ， 95% 乙醇或无水乙醇等 实验原理：植物 DNA 的抽提常采用两种方法：（1） SDS 法： 离子去污剂，过程长，纯度高；（2） CTAB 法：该方法简便、快速， DNA 产量高 ( 纯度稍次，适用于一般分子生物学操作 ) 。 CTAB 是一种非离子去污剂，植物材料在 CTAB 的处理下， 结合 65℃ 水浴使细胞裂解、蛋白质变性、 DNA 被释放出来 。 CTAB 与核酸形成复合物，此复合物在高盐 （ 0.7mM ） 浓度下可溶，并稳定存在，但在低盐浓度 （ 0.1-0.5mM NaCl ） 下 CTAB - 核酸复合物就因溶解度降低而沉淀，而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。经离心弃上清后， CTAB- 核酸复合物再用 70 － 75% 酒精浸泡可洗脱掉 CTAB 。 再经过氯仿 / 异戊醇 (24:1) 抽提去除蛋白质、多糖、色素等来纯化 DNA ，最后经异丙醇或乙醇等 DNA 沉淀剂将 DNA 沉淀分离出来。 实验步骤： 1．采集适量幼嫩叶片，用液 N2 研成粉末， 0.4 g 装入 1.5ml 离心管中（ -20 ℃预冷）。2．预热 1.5 × CTAB 到 95 ℃，加 1ml 到装有叶片粉末的离心管中，混匀（防止冻融）。3．立即置于 65 ℃水浴 30min ，每 5 min，上下颠倒 1 次。4．12000g 离心 5 min。5．吸取上清液约 600μl ，加入等体积（ 600μl ）氯仿 / 异戊醇 (24:1) ，上下颠倒数次，至下层液相呈深绿色为止。6．12000g 离心 5 分钟。7．取 450μl 上清于一新 1.5ml 离心管，加入 1ml 95% 乙醇和 45μl 10M NH4AC ，混匀，室温放置 10min 。8．12000 g 离心 10min ，去上清，用 75% EtOH 浸洗沉淀，自然干燥约 30 min 。9．加入 50μl 1/10 TE 或无菌水（含 20μg/RNase ），置于 4 ℃过夜，待 DNA 溶解后，检测 DNA 浓度及质量。 注意事项： 1．尽量取材幼嫩叶片，如太老，酚类物质多，必须用 10 mM 的β -ME 处理2．研钵预冻，粉末至加 CTAB 前不要融化3．24:1 的氯仿 / 异戊醇抽提时动作应轻柔，转移用的枪头最好是剪宽了的4．所用试剂必需灭菌，手套 思考：　（1） DNA 降解的可能原因　（2）提高 DNA 产量的措施 实验二 总 DNA 质量检测及酶切 - 返回 - 实验目的： 了解掌握检测 DNA 质量的方法以及 DNA 定量的方法；了解影响 DNA 在琼脂糖凝胶中泳动速率的因素；训练 DNA 的琼脂糖凝胶电泳操作及 DNA 的限制性内切酶操作。 实验原理：参见系列一中实验二；限制性内切酶的特点：见“基因操作原理”。 实验材料及试剂：水稻总 DNA 或 BAC 克隆 DNA ，琼脂糖，限制性内切酶 Dra I ， EcoRI ， EcoRV ， HindIII 实验步骤： 1．取 10μl DNA 于 0.8% 凝胶检测；2．将 DNA 调节浓度至 300-400 ng/μl；3．仔细阅读将所用的任何一种酶产品说明书，熟悉反应条件及酶切的贮存浓度（ 10U-50U/μl ）厂家配套试剂；4．计算据反应条件所需要的各种试剂准确用量：（ 0.5 ml tube 中）DNA(3-5μg) 10μl10 × buffer reaction 1.5μlEnzyme (15 U/μl) 0.8μl （冰上）ddH2O 2.7μl混匀，短暂离心；5．37 ℃ 温浴 1-2 hrs ( 纯 DNA) 或 10 hrs （粗制 DNA ）；6．加入上样缓冲液终止酶切反应，也可 6